Введение
2. Обзор литературы 11
2.1. Холинергическая синаптическая передача и роль холиномиметиков в регуляции выброса квантов медиатора в нервно мышечном синапсе 11
2.2. Роль ионов Са2+ в процессе синаптической передачи 13
2.3. Потенциал-зависимые кальциевые каналы 15
2.4. Молекулярные аспекты регуляции освобождения медиатора и пресинаптического уровня кальция в нервном окончании. Роль пресинаптических рецепторов 17
2.5. Участие метаботропных рецепторов в регуляции пресинаптического уровня кальция и выброса квантов медиатора 21
2.5.1. Регуляция активности пресинаптических кальциевых каналов метаботропными рецепторами 21
2.5.2. Ацетилхолиновые мускариновые рецепторы (м-холинорецепторы). Регуляция входа кальция и освобождения медиатора 24
2.5.3. Участие м-холинорецепторов в регуляции секреции квантов медиатора через систему регуляции белков экзоцитоза 26
2.6. Участие ионотропных рецепторов в регуляции пресинаптического уровня кальция и выброса квантов медиатора 28
2.6.1. Влияние ионотропных рецепторов на выброс квантов медиатора 28
2.6.2. Никотиновые ацетилхолиновые рецепторы (н-холинорецепторы) 30
2.6.3. Локализация субъединиц никотиновых ацетилхолиновых рецепторов 32
2.6.4. Физиологически активные вещества, воздействующие на никотиновые холинорецепторы 33
2.6.5. Кальциевая проводимость никотиновых рецепторов 35
2.7. Измерение пресинаптического уровня кальция 39
2.7.1. Методы оценки пресинаптического уровня кальция 39
2.7.2. Кальциевые индикаторы. Измерение Са при помощи флуоресцентных красителей 43
2.7.3. Са -флуоресцентные красители, возбуждаемые видимым светом 48
2.7.4. Высокоаффинные кальциевые индикаторы 49
2.7.5. Низкоаффинные кальциевые индикаторы 51
3. Материалы и методы 54
3.1. Объект исследования 54
3.2. Загрузка препарата флуоресцентным кальциевым красителем 54
3.3. Регистрация кальциевого транзиента 57
3.4. Обработка флуоресцентных сигналов 60
3.5. Выбор метода блокады мышечных сокращений 61
3.6. Электрофизиологические исследования 63
3.7. Реагенты 64
3.8. Статистическая обработка результатов 64
4. Результаты исследований и обсуждение 65
4.1. Оценка влияния загрузки красителя на параметры квантовой секреции 65
4.2. Параметры зарегистрированного кальциевого транзиента 66
4.3. Влияние изменения концентрации кальция в омывающем растворе
на кальциевый транзиент 68
4.4. Действие неселективного блокатора кальциевых каналов кадмия 70
4.5. Влияние ацетилхолина и карбахолина на квантовый состав токов
концевой пластинки 71
4.6. Влияние ацетилхолина и карбахолина на Са -транзиент 72
4.7. Действие агонистов холинорецепторов никотина и мускарина на Са2+-транзиент 74
9+
4.8. Действие холиномиметика карбахолина на Са -транзиент в присутствии антагонистов никотиновых и мускариновых холинорецепторов 76
4.9. Активация мускариновых рецепторов при блокаде никотиновых и активация никотиновых рецепторов при блокаде мускариновых 78
4.10. Выявление подтипов мускариновых рецепторов, опосредующих эффекты холиномиметиков на кальциевый транзиент 80
4.11. Выявление подтипов никотиновых рецепторов, опосредующих эффекты холиномиметиков на кальциевый транзиент 82
4.12. Участие кальциевых каналов в реализации эффектов холиномиметиков на кальциевый транзиент 86
4.13. Проверка гипотезы об участии эндоплазматического ретикулума в формировании угнетающих эффектов холиномиметиков на кальциевый транзиент 87
9+
4.14. Выявление эффектов эндогенного ацетилхолина на Са транзиент 89
9+
4.14.1. Са -транзиент под действием антагонистов никотиновых и мускариновых холинорецепторов 89
4.14.2. Действие ингибитора ацетилхолинэстеразы - прозерина на Са2+-транзиент 92
4.15. Влияние блокады М2-холинорецепторов на интенсивность квантовой секреции ацетилхолина при высокочастотной активности синапса 93 Заключение 96
6. Выводы 103 7. Список сокращений 105
8. Литература
5.
