Введение
Глава 1. Саркомерные цитоскелетные белки семейства тайтина 9
1.1 Структура молекулы тайтина и его функции 9
1.1.1. Структура и функции молекулы тайтина в разных зонах саркомера 10
1.2 Структура и функции молекул С-белка, Х-белка и Н-белка 14
1.2.1. Структура С-белка 14
1.2.2. Структура Х-белка 17
1.2.3. Структура Н-белка 18
1.2.4. Функции С-белка, Х-белка и Н-белка 19
1.3 Белки семейства тайтина в норме, при адаптации и патологаи 20
Глава 2. Амилоидозы 22
2.1. Актуальность проблемы 22
2.2. История изучения амилоидозов 23
2.3. Современные представления о строении и формировании амилоидных фибрилл 24
2.4. Изучение амилоидных фибрилл invitro 29
2.5. Патологические проявления амилоидозов 33
Заключение 37
Цель и задачи исследования 39
И. Экспериментальная часть 40
Глава 3. Материалы и методы 40
3.1. Экспериментальный и клинический материал 40
3.2. Выделение и очистка белковых препаратов 40
3.2.1. Выделение и очистка миозина из скелетных мышц 40
3.2.2. Выделение и очистка миозина из сердечной мышцы 41
3.2.3. Очистка С-белка, Х-белка и Н-белка 43
3.2.4. Выделение тайтина из скелетных мышц 43
3.2.5. Выделение актина из скелетных мышц 44
3.3. Определение концентрации белковых препаратов 45
3.4. Проверка чистоты белковых препаратов 45
3.5. Условия формирования амилоидных фибрилл 46
3.6. Микроскопические исследования 47
3.6.1 Электронная микроскопия 47
3.6.2. Поляризационная и флуоресцентная микроскопия 47
3.7. Спектральные методы 48
3.7.1. Метод кругового дихроизма 48
3.7.2. Метод флуоресцентного анализа 48
3.7.3. Спектрофотометрический метод 48
3.8. Измерение АТФазной активности актомиозина 49
3.9. Исследование клеточной токсичности амилоидных фибрилл Х-белка 49
III. Результаты и обсуждение 51
Глава 4. Образование амилоидных фибрилл белками семейства тайтина 51
4.1 Электронно-микроскопическое изучение агрегационных свойств
молекул тайтина, Х-белка, С-белка и Н-белка скелетных мышц кролика...51
4.2. Электронно-микроскопическое изучение агрегационных свойств АР(25-35)-пептида в сравнении с агрегацией молекул Х-белка 57
4.3. Подтверждение амилоидной природы агрегатов, образуемых белками семейства тайтина (тайтина, Х-белка, С-белка и Н-белка) при их взаимодействии со специфическими красителями на амилоиды Конго красным и тиофлавином Т 58
4.4. Изучение вторичной структуры тайтина и белков его семейства
до и после образования амилоидных фибрилл 62
4.5. Скорость образования амилоидных фибрилл Х-белка 64
4.6. Образование амилоидных фибрилл С-белком миокарда человека
при ДКМП и С-белком миокарда кролика 66
Глава 5. Разрушение амилоидных фибрилл белков семейства тайтина 68
5.1. Разрушающее действие тетрациклина и фуллерена С6о на амилоидные
фибриллы Х-белка и АР(25-35)-пептида 68
Глава 6. Свойства амилоидных фибрилл белков семейства тайтина 73
6.1. Изучение влияния белков семейства тайтина в молекулярной форме и их
амилоидных фибрилл на АТФазную активность актомиозина in vitro 73
6.2. Исследование клеточной токсичности амилоидных фибрилл Х-белка 74
Заключение 78
Выводы 81
Финансовая поддержка работы 82
Список литературы
