Введение
1. Обзор литературы 10
1.1 Краткая история вопроса 10
1.2 Структурное разнообразие АМП 12
1.3 Молекулярная биология антибиотических пептидов 27
1.4 Механизмы антимикробного действия антибиотических пептидов 36
1.5. К вопросу о разнообразии антимикробных пептидов 50
1.6 Функциональные свойства АМП, отличные от антимикробной активности 52
1.7 Прикладные исследования 55
1.8 О состоянии современных знаний об АМП у разных групп животных 56
1.9 Заключение 59
2. Методы исследования 61
2.1 Получение биологического материала 61
2.2 Цитохимические методы 62
2.3 Экстрагирование катионных пептидов 63
2.4 Методы электрофореза 63
2.5 Методы окраски пептидов в полиакриламидных гелях 65
2.6 Обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография 66
2.7 Методы определения концентраций пептидов 66
2.8 Методы определения дисульфидных связей в молекулах пептидов 67
2.9 Методы определения молекулярной массы пептидов 68
2.10 Процедура переноса пептидов HaPVDF мембрану 69
2.12 Определение аминокислотной последовательности пептидов 69
2.13 Методы определения антимикробной активности пептидов 70
2.14 Определение воздействия пептида на проницаемость внутренней мембраны Exoli 74
2.15 Метод определения гемолитической активности пептидов 76
2.16 Метод оценки хемотаксической активности целомоцитов пескожила 77
2.17 Статистическая обработка результатов 77
2.18 Использованные для сравнительных исследований препараты антимикробных пептидов были получены из следующих источников: 78
2.19 Компьютерный анализ аминокислотных последовательностей 78
3. Результаты исследования 79
3.1 Анализ препаратов 79
3.2 Выделение и очистка антимикробных пептидов из целомоцитов пескожила 85
3.2.1 Выделение и очистка ареницинов 85
3.2.2 Определение аминокислотной последовательности ареницинов 91
3.2.3 Выделение и очистка других катионных антимикробных пептидов 91
3.4 Изучение функциональных свойств ареницина-1 102
3.4.1 Исследование антимикробной активности in vitro 102
3.4.1.1 Изучение влияния различных условий среды на проявляемую ареницином
антимикробную активность 104
4.3.2 Изучение влияния ареницина-1 на изменение проницаемости цитоплазматической мембраны грам-отрицательной бактерии Escherichia coli ML-35p ПО
4.3.3 Изучение гемолитической активности ареницинов 115
4.3.4 Взаимодействие ареницина-1 с лизоцимом человека 118
4.3.5 Изучение способности арницина-1 вызывать направленную миграцию целомоцитов пескожила 119
4. Обсуждение результатов 121
4.1 Анализ препаратов целомоцитов 121
4.2 Выделение, очистка и определение первичной структуры ареницинов 122
4.3 Выделение, очистка и характеристика других антимикробных пептидов из целомоцитов пескожила 128
4. 4 Функциональные свойства ареницина-1 130
4.4.1 Антимикробная активность in vitro 130
4. 4. 2 Влияние ареницина-1 на изменение проницаемости цитоплазматической
мембраны грам-отрицательной бактерии Escherichia coli ML-35p 136
4.4.3 Гемолитическая активность ареницина-1 140
4.4.4 Взаимодействие ареницина-1 с лизоцимом 142
4.4.5 Хемотаксическая активность ареницина-1 в отношении целомоцитов пескожила 145
5. Выводы 148
6. Список литературы 150
