Введение
Обзор литературы 9
1. Механизмы действия ингибиторов хинонного типа 9
1.1. Ингибирование электронного транспорта 10
2. Механизмы защиты от ингибирующего действия хинонов 16
2.1. Антиоксидантные системы 16
2.2. Восстановление хинонов с участием НАО(Р)Н:хинон-оксидоредуктаз 17
3. Электрон-транспортная цепь тилакоидной мембраны цианобактерий... 20
3.1. Фотосинтетическая ЭТЦ 22
3.2. Дыхательная ЭТЦ 24
3.2.1. Доноры электронов для дыхательной ЭТЦ 24
3.2.2. МАБ(Р)Н-дегидрогеназы 26
3.2.2.1. NAD(P)H-дегидрогеназа типа 1 (NDH-1) 26
3.2.2.2. NADH-дегидрогеназа типа 2 33
3.3. Сукцинатдегидрогеназа 34
ЗАКомплексцитохромовЬ/ 36
3.5. Цитохромоксидазы дыхательной цепи 37
Материалы и методы 40
Штаммы и плазмиды 40
Условия роста 40
Трансформация Escherichia coli 43
Трансформация Synechocystis 6803 44
Выделение плазмидной ДНК методом кипячения (Holmes, Quigley, 1981) 44
Выделение хромосомной ДНК из клеток цианобактерий 45
Ферментативная обработка ДНК 45
Электрофорез в агарозном геле 46
Элюирование ДНК из агарозного геля 47
Полимеразная цепная реакция 47
Измерение МТТ-редуктазной активности 47
Выделение тилакоидных мембран из клеток Synechocystis 6803 48
Измерение ферментативной активности 48
ЭПР спектроскопия 49
Northern-блоттгибридизация 49
ОТ-ПЦР 50
Компьютерная обработка данных 51
Результаты 52
Дегидрогеназная активность в клетках дикого типа и мутантов 52
Анализ устойчивости к менадиону клеток дикого типа и мутантов 54
Конструирование двойных мутантов 55
Конструирование рекомбинантной плазмиды pUC19::/rg/4::Cm (pBHS::CmR) 56
Конструирование рекомбинантной плазмиды p\JCl9::drgA::Gm (pBHS::GmR) 57
Трансформация клеток мутантов NDH-1, SDH, NDH-2 и Ох 59
Проверка сегрегации мутаций 60
Физиологические характеристики двойных мутантов. 62
Анализ устойчивости к менадиону 63
Ферментативная активность в бесклеточных препаратах дикого типа и мутанта DrgA 64
Восстановление Р700+ в клетках дикого типа и мутантов 66
Экспрессия гена drgA 68
Изучение функции гена drgA с помощью очищенного белка DrgA-12His. 71
Обсуждение 74
Список литературы
