Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Определение, классификация и функции дендритных клеток 12
1.1.1. Типы дендритных клеток 15
1.1.2. Фенотип 18
1.1.2.1. Морфология 18
1.1.2.2 Поверхностные антигены 19
1.1.3. Функции дендритных клеток 23
1.1.3.1. Иммунный ответ 23
1.1.3.2. Толерантность к собственным антигенам
1.2. Дендритные клетки в клинической иммунологии 28
1.3. Дендритные клетки и В-лимфоциты 31
1.4. Созревание дендритных клеток 32
1.5. Методы изучения дендритных клеток
1.5.1. История 36
1.5.2. Получение дендритных клеток in vitro 38
1.5.3. Методы изучения экспрессии генов в дендритных клетках
1.5.3.1. Секвенирование библиотек кДНК 41 .
1.5.3.2. SAGE метод 43
1.5.3.3. Дифференциальный дисплей мРНК 46
1.5.3.4. Гибридизация на кДНК матрицу 48
ГЛАВА 2. Материалы и методы 56
2.1. Получение дендритных клеток in vitro 56
2.2. Фенотигшрование дендритных клеток моноклональными антителами 57
2.3. Выделение суммарной РНК и обработка ДНКазой 1 58
2.4. Обратная транскрипция и амплификация мишеней для макроматриц 59
2.5. Мечение кДНК мишеней для анализа на макроматрице 61
2.6. Гибридизация, детекция и количественный анализ макроматриц 62
2.7. Мечение кДНК мишеней для микроматриц 63
2.8. Гибридизация на микроматрицу и количественный анализ 65
2.9. Полуколичественная полимеразная цепная реакция на матрице кДНК 67
2.10. Прямое секвенирование нуклеотидных последовательностей фрагментов кДНК и поиск гомологии 70
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение 72
3.1. Получение in vitro незрелых и зрелых дендритных клеток человека. Фенотипирование поверхностных маркеров 73
3.2. Мониторинг экспрессии генов в моноцитах и незрелых дендритных клетках методом гибридизации на макроматрице 78
3.3. Подтверждение профилей гибридизации на кДНК макроматрицу методом полуколичественной ПЦР на матрице кДНК 97
3.4. Мониторинг экспрессии генов в незрелых и зрелых дендритных клетках методом гибридизации на микроматрицу 99
3.5. Подтверждение профилей гибридизации на кДНК микроматрице методом полуколичественной ПІ (Р на матрице кДНК 115
3.6. Экспрессия генов ренин-ангиотензиновой системы 119
Заключение 125
Выводы 129
Список литературы
