Введение
Глава 1. Обзор литературы 15
1.1. Стабильность экспрессии и наследование чужеродных генов у трансгенных растений 15
1.1.1. Клонирование генов для переноса их в геном растений 15
1.1.2. Создание генетических конструкций 16
1.1.3. Перенос созданных генетических конструкций в геном растений 18
1.1.3.1. Агробактериальная трансформация: генетическая карта Ti-плазмиды и Т-ДНК 19
1.1.3.2. Общая схема переноса Т-ДНК в клетки растений 20
1.1.3.3. Перенос векторных последовательностей в процессе агробактериальной трансформации 24
1.1.4. Оценка трансгенных растений по стабильности экспрессии перенесенных генов и отбор отдельных трансформантов для дальнейшей селекционной доработки 26 -
1.1 .4.1, Наследование трансгенов у трансгенных растений... 261
1.1.4.2. Вариабельность экспрессии перенесенных генов 27
1.2. Изменение экспрессии перенесенных генов в новом окружении генома растений: эффект замолкания 30*
1.2.1. Частота инактивирования трансгенов у независимо полученных трансгенных растений 1.2.2. Возможные причины инактивирования трансгенов 31
1.2.3. Молекулярные механизмы инактивации трансгенов 37
1.2.4. Генетический контроль инактивации/реактивации трансгенов 40
1.3. Изменение проявления» собственных генов у трансгенных растений: Т-ДНК-индуцированные мутации 42
1.3.1. Возможные причины возникновения Т-ДНК индуцированных мутаций 42
1.3.2. Примеры Т-ДНК индуцированных мутаций у трансгенных растений 45
1.3.3. Перспективы использования инсерционного мутагенеза 53
Глава 2. Материалы и методы 55
2.1. Создание исходного материала 55
2.2. Подтверждение трансгенной природы растений-трансформантов 59
2.3. Анализ стабильности экспрессии маркерного гена nptll на селективных средах с антибиотиком канамицином 60
2.4. Анализ фрагментов векторной ДНК у трансгенных растений 62
2.5. Создание коллекции трансгенных растений табака с мутантным фенотипом 64
2.6. Анализ цитологического фенотипа трансгенных растений, характеризующихся измененной структурой цветка и пониженным уровнем мужской фертильності! 65
Глава 3. Результаты и обсуждение 67
3.1. Анализ популяции трансгенных растений табака по стабильности экспрессии маркерного гена nptll. 67
3.1.1. Анализ трансгенных растений табака сорта «Gatersleben» по стабильности экспрессии nptll-гена 67
3.1.2. Анализ трансгенных растений табака линии SR1 по стабильности экспрессии nptll-гена 3.1.3. Анализ инактивированного состояния гена nptll у трансгенных растений То-10, Nu22 и 3.1.4. Анализ стабильности экспрессии и наследование гена nptll у трансгенных растений табака (линия SR1) с одной инсер-цией Т-ДНК на геном 73
3.1.5. Анализ стабильности экспрессии гена nptll у трансгенных растений табака (линия SR1) со множественными инсер-циями Т-ДНК на геном 78
3.1.6. Анализ стабильности экспрессии гена nptll у трансгенных растений табака с отклонениями от менделевского расщепления 81
3.2. Анализ стабильности экспрессии гена nptll у трансгенных рас
тений табака при инбридинге 89
3.2.1. Наследование гена nptll у трансгенных растений линий Т0-5 иТ0-6 89
3.2.2. Анализ нестабильности экспрессии гена nptll у растений линий Т0-5 и Т0-6 96>
3.2.3. Анализ взаимодействия аллелей гена nptll у трансгенных растений линии Т0-5 108
3.3. Моделирование нестабильной экспрессии чужеродных генов у трансгенных растений 119
3.4. Т-ДНК-индуцированные мутации у трансгенных растений табака 127
3.4.1. Создание и анализ коллекции трансгенных растений табака с мутантным фенотипом 127
3.4.2. Анализ цитологических нарушений мейоза у трансгенных растений табака линии Res79 144
3.4.3. Интеграция векторной ДНК в геном трансгенных растений табака 156
3.4.3.1. Анализ трансгенных растений табака с мутантным фенотипом на наличие в геноме векторной ДНК 156
3.4.3.2. Анализ трансгенных растений табака, не проявляющих мутантного фенотипа, на наличие в геноме векторной ДНК 159
3.4.4. Анализ районов встраивания Т-ДНК инсерций у трансген ных растений табака с мутантным фенотипом 161
Заключение 165
Выводы 172
Список литературы 174
Приложение 192
