Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы.
1.1. Введение 11
1.2. Основная часть 14
1.2.1. Структура рафта 15
1.2.2. Белковый состав рафтов 18
1.2.3. Рафты - динамичные мембранные структуры 21
1.2.4. Размеры рафтов 22
1.2.5. Методы изучения рафтов 24
1.2.6. Функции рафтов 28
1.2.7. Липидные рафты и болезни человека 33
1.3. Заключение 35
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Материалы
2.1 Л. Клетки и их источники 37
2.1.2. Антитела 37
2.1.3. Растворы, использованные в работе 38
2.1.4. Прочие реагенты и материалы, используемые в работе 38
2.2. Методы
2.2.1. Экстракция клеток раствором неионного детергента ТХ-100 38
2.2.2. Экстракция клеток в растворах различных детергентов 39
2.2.3. Цитофлуориметрический тест 39
2.2.4. Обработка клеток проназой 40
2.2.5. Обработка клеток метил-|3-циклодекстрином 40
2.2.6. Обработка клеток цитохалазином Б 40
2.2.7. Определение резистентности поверхностных антигенов лейкоцитов человека к действию ТХ-100 40
2.2.8. Определение резистентности поверхностных антигенов к действию различных детергентов 41
2.2.9. Детекция образцов с помощью проточной цитометрии 41
2.2.10. Обработка результатов экспериментов 42
2.2.11. Измерения с помощью конфокальной микроскопии 42
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований.
3.1. Отработка методики получения клеточных остатков 43
3.2. Собственная ТХ-100 резистентность поверхностных антигенов 45
3.3. Сравнение детергентной резистентности поверхностных антигенов на различных мишенях 50
3.4. Определение локализации высокорезистентных антигенов 51
3.5. Солюбилизация поверхностных антигенов в разных детергентах 59
3.6. Влияние метил-р-циклодекстрина на резистентность поверхностных антигенов 66
3.7. Приобретенная резистентность поверхностных антигенов к действию Тритона Х-100.
3.7.1. Антитело-индуцированная резистентность поверхностных антигенов...69
3.7.2. Индукция другими лигандами 74
3.8. Эксперименты по коиндукции 77
3.9. Коиндукция CD20 и HLA-DR 79
3.10. Анализ антитело-опосредованной резистентности 80
3.11. Изучение влияния на антитело-опосредованную резистентность агентов, модифицирующих мембранные микродомены.
3.11.1. Действие метил-Р-циклодекстрина на антитело-индуцированную резистентность 82
3.11.2. Влияние Brij 58 на индукцию резистентности 83
3.12. Участие компонентов цитоскелета в антител о-индуцированной резистентности 85
ГЛАВА 4. Обсуждения полученных результатов.
4.1. Клеточные остатки - подходящий объект изучения рафтов с помощью проточной цитометрии 89
4.2 Собственная резистентность поверхностных антигенов к действию детергента ТХ-100 89
4.3. Сравнение резистентности антигенов на различных клетках мишенях 91
4.4. Определение локализации ТХ-100 резистентных антигенов лейкоцитов человека 92
4.5. Солюбилизация антигенов в разных детергентах 93
4.6. Приобретенная резистентность поверхностных антигенов к действию ТХ-100 94
4.7. Коиндукция разных антигенов 97
4.8. Анализ антитело-опосредованной резистентности 97
4.9. Участие компонентов цитоскелета в механизме антитело-индуцированной ТХ-100 резистентности поверхностных антигенов 99
4.10. Заключение 101
ВЫВОДЫ 103
Список использованной литературы
