Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1. Апоптоз и другие пути гибели клеток 10
1.1.1. Молекулярные механизмы апоптоза 13
1.2. Гестагены 18
1.2.1. Молекулярные механизмы действия гестагенов 19
1.2.2. Рецепторы прогестерона 19
1.2.3. Мишени рецепторов прогестерона 23
1.3. Антрациклиновые антибиотики 31
1.3.1. Противоопухолевая активность антрациклинов 32
1.3.2. Влияние антрациклинов на активность топоизомеразы II 32
1.3.3. Антрациклины и апоптоз. Роль повреждения ДНК и белка р53 33
1.3.4. Дополнительные механизмы действия антрациклинов 35
1.4. Основные принципы лекарственной терапии злокачественных новообразований 39
1.5. Гестагены, апоптоз и антрациклиновые антибиотики 41
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования 51
2.1. Химическая структура изучаемых гестагенов 51
2.2 Используемые реактивы 54
2.3. Объекты исследования 55
2.4. Метод культивирования клеток (Фрешни, 1989) 55
2.5. Методы оценки противоопухолевой активности изучаемых соединений 55
2.5.1. Интегральный МТТ-тест оценки жизнеспособности и метаболической активности опухолевых клеток (Mealey, 2002) 55
2.5.2. Оценка экспрессии онкобелка bcl-2 методом иммуногистохимического окрашивания 56
2.5.3. Колориметрическое измерение активности каспазы 3 58
2.5.4. Выделение ДНК из образца клеток методом фенол-хлороформной экстракции 59
2.5.5. Определение количества ДНК в образце 60
2.5.6. Электрофорез экстракта геномной ДНК в агарозном геле и флуориметрическая оценка апоптоза в культуре клеток 60
2.6. Статистическая обработка результатов 63
ГЛАВА 3. Результаты работы 64
3.1. Влияние новых гестагенов и доксорубицина на жизнеспособность опухолевых клеток линий MCF-7 и HeLa 64
3.1.1. Цитостатическая активность новых гестагенов на культурах клеток. Концентрационная и временная зависимости 64
3.1.2. Подавление жизнеспособности клеток культуры MCF-7 под действием гестагенов 67
3.1.3. Подавление жизнеспособности клеток культуры MCF-7 под действием доксорубицина в сочетании с гестагенами 69
3.1.4. Подавление жизнеспособности клеток культуры HeLa под действием гестагенов 72
3.1.5. Подавление жизнеспособности клеток культуры HeLa под действием доксорубицина в сочетании с гестагенами 73
3.2. Индукция апоптоза под действием гестагенов 76
3.2.1. Фрагментация ДНК в культуре клеток MCF-7 под действием гестагенов 76
3.2.2. Фрагментация ДНК в культуре клеток MCF-7 под действием доксорубицина 78
3.2.3. Апоптоз в культуре клеток MCF-7 под действием гестагенов в комбинации с доксорубицином 82
3.2.4. Экспрессия антиапоптотического белка Вс1-2 в культуре клеток MCF-7 при инкубации с гестагенами и доксорубицином 85
3.2.5. Активность каспазы 3 в культуре клеток HeLa при инкубации с гестагенами и доксорубицином 88
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов 93
Заключение 109
Выводы 111
Список литературы 112
