Введение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 9
1. Агрегация белков 9
1.1. Классификация агрегации белков по структуре агрегатов 9
1.2. Упорядоченная агрегация белков 10
1.3. Неупорядоченная (аморфная) агрегация белков 14
1.4. Связь агрегации белков с заболеваниями человека и животных 28
1.4.1. Амилоидные заболевания 28
1.4.2. Приопные инфекции 33
1.4.3. Прочие заболевания 35
1.5. Влияние детергентов на агрегацию белков 36
1.5.1. Понятие детергентов 37
1.5.2. Индукция и ингибирование детергентами аморфной агрегации белков 41
1.5.3. Индукция и ингибирование детергентами амилоидной агрегации 50 белков
1.5.4. Детергенты как "искусственные шапероны" 54
2. БО ВТМ как модель для изучения агрегации белков 59
2.1. Структура вириона ВТМ 59
2.2. Упорядоченная агрегация БО ВТМ ("полимеризация") 60
2.2.1. Разнообразие упорядоченных агрегатов БО ВТМ 60
2.2.2. Структура БО ВТМ в составе вирионов ВТМ 62
2.2.3. Структура БО ВТМ в составе 20S-дисков 62
2.3. Неупорядоченная (аморфная) термоиндуцироваиная агрегация БО ВТМ 64
2.3.1. Зависимость термоиндуцированной агрегации БО ВТМ от условий 65 среды
2.3.2. Температура термической денатурации БО ВТМ 67
2.3.3. Частично развернутая форма БО ВТМ 68
2.3.4. Механизм термической денатурации БО ВТМ 68
2.3.5. Кинетический анализ прироста мутности при термоиндуцированной 72 агрегации БО ВТМ
2.3.6. Взаимодействия белковых молекул в ходе термоиндуцированной 73 агрегации БО ВТМ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 75
1. Материалы 75
2. Накопление и выделение вирионов ВТМ 75
3. Выделение белка оболочки ВТМ 75
4. УФ-спектроскопия 76
5. Определение истинного поглощения светорассеиваюших систем методом экстраполяции
6. Турбидиметрия 77
7. Флуоресцентная спектроскопия 77
8. Спектроскопия кругового дихроизма 78
9. Аналитическое ультрацентрифугирование 78
10. Динамическое лазерное светорассеяние 79
11. Дифференциальная сканирующая калориметрия 79
12. Определение ККМ детергентов методом УФ-спектроскопии (методика Reis и 80 соавт.)
13. Определение стехиометрии связывания ЦТАБ и ВО ВТМ 80
14. Математические расчёты 81
РЕЗУЛЬТАТЫ 82
1. Влияния детергентов разных групп на термоиндуцироианпую (52 С) аморфную агрегацию БО ВТМ
1.1. Анионный детергент ДСН 82
1.1.1. Ингибирование термоиндуцированной агрегации БО ВТМ 82
1.1.2. Реверсия термоиндуцированной агрегации БО ВТМ при помощи ДСН 86
1.2. Катионпый детергент ЦТАБ 88
1.2.1, Низкие концентрации ЦТАБ значительно ускоряют ход термоиндуцированной агрегации БО ВТМ
1.2.2. ЦТАБ в высоких концентрациях проявляет свойства "искусственного шапсропа" в отношении БО ВТМ
1.3. Неионный детергент Тритон Х-100 в зависимости от концентрации по-разному влияет на термоиндуцированную агрегацию БО ВТМ
2, Влияния трёх разных детергентов на БО ВТМ при комнатной температуре
2.1. Индукция аморфной агрегации ВТМ и его БО при 25 С катионным детергентом ЦТАБ
2.1.1. Зависимость кинетики прироста мутности от соотношения компонентов в ходе агрегации БО ВТМ. индуцируемой ЦТАБ
2.1.2. Влияние ионной силы среды на кинетику индуцированной ЦТАБ агрегации БО ВТМ
2.1.3. Структура молекул БО ВТМ в составе ЦТАБ-индуцированных агрегатов
2.1.4. Стехиометрия детергент-белковых комплексов 98
2.1.5. Определение ККМ ЦТАБ по методике, предложенной Reis и соавт. 100
2.1.6. Реверсия ЦТАБ-индуцированной агрегации БО ВТМ при помощи ДСН
2.1.7. Структура молекул БО ВТМ, освобождённых из ЦТАБ- 105 индуцированных агрегатов
2.1.8. Сравнение кинетики ЦТАБ-индуцированной (при 25 С) и термоиндуцированной (при 52 С) агрегации БО ВТМ методом ДЛС
2.1.8.1. Изучение методом ДЛС термоиндуцированной агрегации БО 107 ВТМ
2.1.8.2. Изучение методом ДЛС ЦТАБ-индуцированной агрегации БО 117 ВТМ
2.1.9. Сравнение кинетики ЦТАБ-индуцированной агрегации БО ВТМ разными методами
2.1.10. "Сверхнизкие" концентрации ЦТАБ препятствуют агрегации БО J20 ВТМ в процессе хранения на комнатной температуре
2.1.11. Агрегация цельных вирионов ВТМ, индуцируемая ЦТАБ при 25 С 122
2.2. Влияние анионного детергента ДСН на БО ВТМ при комнатной температуре 122
2.3. Индукция аморфной агрегации БО ВТМ неионным детергентом Тритон Х- 125 100
2.3.1. Зависимость кинетики прироста мутности в ходе агрегации БО ВТМ 125 от температуры
2.3.2. Зависимости кинетики прироста мутности в ходе агрегации БО ВТМ 128 при 30 С от соотношения компонентов
2.3.3. Определение ККМ Тритон Х-100 по методике, предложенной Reis и 128 соавт.
2.3.4. Зависимость кинетики прироста мутности в ходе агрегации БО ВТМ 130 при 30 С от ионной силы среды
2.3.5. Изучение влияния Тритон Х-100 на БО ВТМ методом ДСК 132
2.3.6. Изучение методом ДЛС аморфной агрегации БО ВТМ. 132 индуцированной Тритон Х-100 при 30 С
2.3.7. Реверсия ДСН аморфной агрегации БО ВТМ, индуцированной Тритон 133 Х-100приЗОС
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 136
1. Влияние детергентов разных групп на термоиндуцированную (52 С) аморфную агрегацию БО ВТМ
2. Влияние детергентов разных групп на БО ВТМ при комнатной температуре 143 ВЫВОДЫ 155 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 156
