Введение
2. Протеолитические ферменты и способы регуляции их активности 9
2.1. Классификация протеолитических ферментов 10
2.1.1. Сериновые протеиназы 11
2.1.2. Химотрипсинподобные протеиназы: характеристика и физиологическая активность 12
2.2. Способы регуляции активности протеолитических ферментов 16
2.2.1. Зимогены - неактивные предшественники протеиназ 17
2.2.2. Регуляция активности протеиназ с помощью ингибиторов 19
2.2.2.1. Классификация ингибиторов протеиназ по механизму действия 22
2.2.2.2. Общая характеристика ингибиторов сериновых протеиназ 24
2.2.2.3. Пространственные структуры ингибиторов сериновых протеиназ... 28
2.2.2.4. Доменные структуры ингибиторов сериновых протеиназ 30
2.2.2.5. Каноническая конформация связывающей петли 33
2.2.2.6. Семейство Кунитца 35
2.3. Ингибиторы протеиназ актиний 37
2.3.1. Низкомолекулярные ингибиторы протеиназ актиний 38
2.3.2. Эквистатин - высокомолекулярный ингибитор протеиназ актинии Actinia equina 40
2.3.3. Биологическая роль и применение ингибиторов протеиназ актиний 41
3. Результаты и обсуждение 43
3.1. Выделение и некоторые физико-химические характеристики ингибиторов протеиназ из актинии Radianthus macrodactylus 44
3.2 Установление аминокислотной последовательности ингибиторов протеиназ 51
3.2.1. Определение N-концевой аминокислотной последовательности ингибиторов Rmln I и Rmln II 51
3.2.2. Установление полной аминокислотной последовательности ингибитора InhVJ 52
3.3. Изучение пространственной организации ингибитора InhVJ 56
3.4. Определение констант ингибирования 60
3.5. Определение антигистаминной активности ингибиторов сериновых протеиназ Rmln I и Rmln II 60
3.6. Изучение взаимодействия ингибиторов с протеолитическими ферментами 63
3.6.1. Масс-спектрометрический анализ комплексов ингибиторов протеиназ Rmln I и Rmln II с трипсином и а-химотрипсином 63
3.6.2. Исследование специфичности ингибитора InhVJ методом биосенсорного анализа 64
3.7. Компьютерное моделирование пространственной структуры ингибитора InhVJ
и его комплексов с сериновыми протеиназами и потенциал-зависимым К+- каналом 67
3.7.1. Построение модели пространственной структуры ингибитора InhVJ 69
3.7.2. Теоретическое предсказание структуры комплексов ингибитора InhVJ с трипсином, а-химотрипсином и потенциал-зависимым К+-каналом 73
4. Экспериментальная часть 83
4.1. Материалы 83
4.2. Методы 84
Выводы 90
Список литературы 91
