Введение
1. Обзор литературы 12
1.1 Нейродегенеративные заболевания 12
1.2 Болезнь Альцгеймера (БА): клиническая и патоморфологическая симптоматика, диагностика и лечение 12
1.2.1 Патоморфологические и патогистологические признаки БА 14
1.2.2 Семейные и спорадические формы БА 18
1.2.3 Участники патологических процессов при БА 22
1.3 Эпигенетика и БА 25
1.3.1. Эпигенетическая модификация гистонов при БА 26
1.3.2 Метилирование ДНК при БА 26
1.3.3 Роль микроРНК в БА 27
1.4 Лечение БА: существующие лекарственные препараты и препараты, находящиеся в разработке 28
1.5 Моделирование основных признаков БА на животных 36
2. Материалы и методы 40
2.1 Линии мух, использованные в работе, и условия их содержания 40
2.2 Анализ выживаемости трансгенных особей Drosophila melanogaster на стадии куколки 42
2.3 Приготовление образцов для микроскопии морфологических изменений внешних органов и ротового аппарата трансгенных особей Drosophila melanogaster на стадии имаго 43
2.4 Оценка количества морфологических аномалий в трансгенных особях Drosophila melanogaster 43
2.5 Выделение РНК 44
2.6 Обратная транскрипция 44
2.7 Проведение ПЦР в реальном времени 44
2.8 Определение статуса метилирования промоторной области генов syt1 и n-syb 47
2.9 Анализ выживаемости трансгенных особей Drosophila melanogaster на стадии имаго 48
2.10 Определение и анализ уровня нейродегенерации в мозге взрослых трансгенных особей Drosophila melanogaster 48
2.11 Подготовка образцов и проведение конфокальной микроскопии для детекции амилоида в мозге имаго Drosophila melanogaster 49
2.12 Оценка изменения локомоторной активности, способности к обучению и формированию памяти трансгенных особей Drosophila melanogaster на стадии имаго 59
2.13 Измерение уровня белков в мозге трансгенных особей Drosophila melanogaster 51
2.14 Статистическая обработка данных 53
3. Результаты и обсуждение 54
3.1 Аномалии развития Drosophila с гиперэкспрессей гена APP и с образованием А 54
3.1.1 Выживаемость на стадии куколки трансгенных особей Drosophila c гиперэкспрессией гена APP человека и образованием А 54
3.1.2 Морфологические изменения имаго Drosophila c гиперэкспрессией гена APP человека и образованием А 55
3.1.3 Распределение морфологических аномалий имаго Drosophila в зависимости от генотипа исследуемых мух 59
3.2 Транскрипционные изменения генов синаптических белков в мозге взрослых мух при гиперэкспрессии APP и образовании А 63
3.2.1 Изменение уровня мРНК генов syt1 и n-syb в мозге взрослых трансгенных особей Drosophila 65
3.3 Метилирование ДНК как один из факторов, регулирующих 4 активность генов синаптических белков в трансгенных особях
Drosophila 72
3.4 Изучение влияния содержания взрослых особей Drosophila melanogaster c экспрессией последовательности, кодирующей пептид А42, на среде с дрожжами-продуцентами красного пигмента на амилоидогенез и нейродегенеративные процессы в мозге мух 74
3.4.1 Изучение влияния потребления красного штамма дрожжей трансгенными особями Drosophila melanogaster на амилоидогенез в мозге взрослых мух 76
3.4.2 Изучение влияния потребления красного штамма дрожжей трансгенными особями Drosophila melanogaster на нейродегенерацию в мозге взрослых мух 80
3.4.3 Анализ влияния потребления красного штамма дрожжей трансгенными особями Drosophila melanogaster на выживаемость взрослых мух 82
3.4.4 Анализ влияния потребления красного штамма дрожжей на локомоторные функции, способность к обучению и память трансгенных особей Drosophila melanogaster 83
Выводы 85
Список литературы
