Введение
Глава 1 ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ В ЭКОЛОГИИ И СИСТЕМАТИКЕ ГАДЮКОВЫХ ЗМЕЙ (обзор литературы) 11
1.1 Эколого-морфологическая характеристика гадюки Никольского 11
1.2 Цитологическая и молекулярно-биологическая характеристика гадюковых змей 17
1.3 Развитие систематики от морфологии до молекулярной биологии... 22
1.4 Методы молекулярной биологии, используемые для определения таксономического статуса и выяснения родственных отношений 26
1.4.1 Биохимические маркеры 26
1.4.2 RFLP-анализ 28
1.4.3 Методы, основанные на полимеразой цепной реакции 29
1.4.3.1 RAPD, AFLP-анализ 31
1.4.3.2 Анализ полиморфизма повторяющихся последовательностей 36
1.4.3.3 Анализ полиморфизма нуклеотидных последовательностей 41
Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 49
2.1 Материалы и реактивы 49
2.2 Приборная база 50
2.3 Методы исследования 51
2.3.1 Выделение ДНК 51
2.3.2 Проведение полимеразной цепной реакции 53
2.3.3 Проведение электрофореза в агарозном геле 53
2.3.4 Экстракция ДНК из агарозного геля 54
2.3.5 Секвенирование ПЦР продуктов по Сенгеру 55
2.3.6 Фрагментный анализ микросателлитных локусов 56
2.3.7 Анализ нуклеотидных последовательностей и микросателлитных
локусов 56
Глава 3 ИССЛЕДОВАНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РОДСТВА ГАДЮКОВЫХ ЗМЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИТОХОНДРИАЛЬНОЙ ДНК 58
3. 1 Обоснование выбора молекулярно-генетических маркеров для исследования генетического родства гадюк 61
3.2 Подбор олигонуклеотидных праймеров для амплификации, митохондриальных генов 66
3.3 Исследование генетического родства гадюк с использованием митохондриального гена НАДН-дегидрогеназы (Субъединицы 2 -ND2) 67
3.4 Исследование генетического родства гадюк с использованием митохондриального гена цитохром с оксидазы (Субъединицы 3 — СО III) 76
3.5 Исследование генетического родства гадюк с использованием митохондриального гена 12S рибосомной РНК 84
Глава 4 ВНУТРИВИДОВАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ И ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ СЕГРЕГАЦИЯ ГАДЮКОВЫХ ЗМЕЙ 93
4.1 Исследование внутривидовой вариабельности гадюки Никольского и обыкновенной гадюки с использованием микросателлитных локусов 93
4.2 Разработка сценария расселения и формирования ареалов гадюки Никольского и обыкновенной гадюки 114
Глава 5 РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ГАДЮКОВЫХ ЗМЕЙ 117
5.1 Подбор олигонуклеотидных праймеров для генотипирования гадюковых змей 117
5.2 Экспериментальная проверка работоспособности технологии генотипирования гадюковых змей 119
ВЫВОДЫ 122
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 124
ПРИЛОЖЕНИЕ 137
