Введение
1. Обзор литературы
1.1 Принципы противоопухолевого иммунитета. Иммунологическая компетентность и рак 16
1.2. Характеристика эффекторов противоопухолевого иммунитета 18
1.2.1. Цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ), Т-киллеры 18
1.2.2. Натуральные киллеры (НК) 19
1.2.3. НКТ-клетки 25
1.2.4. Лимфокинактивированные клетки киллеры (ЛАК). ЛАК феномен 25
1.2.5. Дендритные клетки 30
1.3. Адоптивная иммунотерапия злокачественных новообразований 43
1.3.1. ИЛ-2/ЛАК-терапия 44
1.3.2. TIL-терапия 48
1.4. Противоопухолевые вакцины на основе антигенпрезентирующих клеток 49
2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы исследования 54
2.1.1. Экспериментальные животные 54
2.1.2. Клеточные линии 54
2.1.3. Модели опухолей и методика их перевивки 54
2.1.4. Питательные среды 55
2.1.5. Реактивы 55
2.2. Методы исследования 56
2.2.1. Методика выделения МНК периферической крови 56
2.2.2. Методика выделения МНК из интактной ткани и изпаратуморальной области печени 56
2.2.3. Методика выделения CD34+ клеток-предшественников из костного мозга и селезенки мышей и человека 57
2.2.4. Методика выделения МНК из экссудата 57
2.2.5. Световая микроскопия 58
2.2.6. Цитологическое исследование 58
2.2.7. Электронная микроскопия 58
2.2.8. Окрашивание клеток витальным красителем МТТ. 58
2.2.9. Цитотоксический тест 59
2.2.10. Иммуноферментный анализ (ИФА) 60
2.2.11. Проточная цитометрия (FACS-анализ) и характеристика антител 60
2.2.12. Статистические методы 62
3. Результаты собственных исследований
3.1. Способ генерации и особенности иммунофенотипа, морфологии и функциональной активности ЛАК клеток 63
3.1.1 .Способ генерации ЛАК клеток из различных источников 63
3.1.2. Цитотоксическая активность ЛАК 63
3.1.3. Изучение спонтанной продукции цитокинов ЛАК 70
3.1.4. Цитологическая характеристика ЛАК 71
3.1.5. Иммунофенотип ЛАК 73
3.2. НКТ-клетки 82
3.3. Способы генерации и характеристика дендритных клеток 86
3.3.1.Получение ДК из CD34+ предшественников костного мозга, МНПК и селезенки мышей и человека 86
3.3.2. Оценка продукции цитокинов ДК различной степени зрелости 89
3.3.3. Морфологические особенности ДК (цитологическая картина) 90
3.3.4. Изучение особенностей иммунофенотипа ДК человека и мышей 94
3.4. Изучение противоопухолевого эффекта совместного применения ДК и ЛАК в системе in vitro 103
3.5. Исследование противоопухолевой активности ЛАК и аутовакцин на основе ДК на перевиваемых опухолях 111
4. Обсуждение 115
5. Выводы 123
6. Практические рекомендации 124
7. Список литературы
