Введение
2.Обзор литературы... 15
2.1. Стресси иммунная система 15
2.1.1.Взаимодействие нервной и иммунной систем 17
2.1.2.Действие стресса на иммунную и нервную системы 19
2.1.2.1 .Иммобилизациопный стресс 21
1.2.2.Психоэмоциональный стресс 22
2.2. Экспрессия генов немедленного и раннего ответа как молекулярно-бнологическая основа реализации реакций на стрессирующие воздействия ...23
2.3.Протоонкоген c-fos как маркер активации клеток ЦНС 24
2.3.1.Общие сведения 24
2.3.2.Экспрессия гена c-fos 26
2.3.2.1.Индукторы активации гена c-fos и механизмы его экспрессии 26
2.3.2.2. Экспрессия гена c-fos в клетках нервной системы 27
2.3.3.Влияние стресса на экспрессию гена c-fos 30
2.4. Интерлейкин-2 как маркер активации определенных клеток иммунной системы 33
2.4.1.Общие сведения 33
2.4.2.Общие механизмы регуляции индуцибельных генов 35
2.4.3.Регуляция экспрессии гена интерлейкина-2 белковыми
транс-факторами 36
2.4.4.Экспрессия гена интерлейкина-2 в клетках нервной системы 41
2.4.5.Влияние стресса на экспрессию гена интерлейкина-2 44
2.5.3аключение 44
З.Методы исследования 46
3.1. Анализ синтеза ИЛ-2 мРНК и c-fos мРНК
лимфоцитами селезенки и клетками ткани головного мозга 46
3.1.1 .Модели стрессорного воздействия 46
3.1.2. Определение содержания ИЛ-2 мРНК и c-fos мРНК в клетках тканей селезенки 46
3.1.2.1. Получение и инкубация лимфоцитов 46
3.1.2.2. Выделение тотальной мРНК. 47
3.1.2.3. Выявление комплекса dig^HK-мРНК 48
3.1.3. Получение меченых ДНК-зондов 49
3.1.3.1 Трансформация клеток E.coli плазмидной ДНК, содерэ/сащей кДНК ИЛ-2 или кДНК v-fos 49
3.1.3.2. Выделение плазмидной ДНК из E.coli методом щелочной экстракции 50
3.1.3.3. Рестрикция ДНК эндонуклеазами 52
3.1.3.4. Электрофорез ДНК в агарозном геле 53
3.1.3.5. Выделение фрагментов ДНК из лекгоплавкой агарозы 53
3.1.3.6. Нерадиактивное мечение кДНК-фрагментов дигоксигеиином 54
3.1.4. Определение содержания c-fos мРНК и ИЛ-2 мРНК в клетках тканей головного мозга крыс 55
3.1.4.1. Получение срезов головного мозга крыс 55
3.1.4.2. Анализ содерэ/сания ИЛ-2 и c-fos мРНК методом гибридизации in situ на срезах головного мозга крыс 56
3.1.4.3.Иммунодетекция комплекса dig^MPHK-кДНК 57
3.2. Иммунохимическое выявление c-Fos- и ИЛ-2-подобных белков в тканях головного мозга 57
3.2.1. Иммунохимическое выявление c-Fos-подобных белков в тканях головного мозга крыс
3.2.1.1. Получение срезов головного мозга крыс 57
3.2.1.2. Иммунохимическое выявление c-Fos-подобного белка 58
3.2.2. Иммунохимическое выявление ИЛ-2-подобного белка с использованием моноклональных ИЛ-2 антител 59
3.2.2.1. Приготовление проб для определения содерэ/сания ИЛ-2-подобного белка в структурах головного мозга мышей 59
3.2.2.2. Шшунохішическое выявление ИЛ-2-подобного белка 59
3.3. Статистическая обработка результатов 60
Результаты исследования 61
4.1. Влияние ротационного стресса на экспрессию генов c-fos и интерлейкина-2 в лимфоцитах селезенки мышей и клетках головного мозга крыс 61
4.1.1. Влияние ротационного стресса на экспрессию гена c-fos и интерлейкина-2 в лимфоцитах селезенки мышей 61
4.1.1.1. Влияние ротационного стресса на экспрессию c-fos мРНК в лимфоцитах селезенки мышей 62
4.1.1.2. Влияние ротационного стресса на экспрессию ИЛ-2 мРНК в лимфоцитах селезенки мышей 65
4.1.2.Влияние ротационного стресса на экспрессию генов c-fos мРНК и ИЛ-2 мРНКв клетках головного мозга крыс 68
4.1.2.1. Влияние ротационного стресса на экспрессию c-fos мРНК в клетках головного мозга крыс 69
4.1.2.2. Влияние ротационного стресса на экспрессию ИЛ-2 мРНК в клетках головного мозга крыс 69
4.2. Влияние болевых и комплексных стрессорных воздействии на экспрессию генов c-fos и ИЛ-2 в клетках спинного и головного мозга крыс 72
4.2.1. Влияние стрессорных воздействий на синтез c-fos мРНК и ИЛ-2 мРНК в головном мозге крыс через 2 часа после применения стимула 75
4.2.2.Влияние стрессорных воздействий на синтез c-Fos- и ИЛ-2-подобных белков в головном мозге крыс 83
5.0бсуждение результатов 91
6.Выводы 101
7.Список литературы
