Введение
ЧАСТЬ I. Обзор литературы
Глава 1. Биологические свойства TLR — структура, специфичность, внутриклеточный каскад, гены-мишени 13
Глава 2. Вклад кишечного эпителия в естественноый иммунитет слизистой кишечника 21
Глава 3. Экспрессия и функции TLR в эпителии кишечника 26
ЧАСТЬ II. Собственные исследования
Глава 4. Материалы и методы 29
4.1. Клеточные культуры и реагенты для их культивирования.
4.2. Векторы эскспрессии и последовательности кДНК.
4.3. Гены-репортеры.
4.4. Транзиторная экспрессия генов в клеточных культурах, стимуляция клеток и анализ клеточной активации .
4.5. Бактериальные штаммы и их культивирование.
4.6. Бактериальная инфекция клеточных культур.
4.7. Метод коиммунопреципитации и Western blot.
4.8. Метод иммуногистохимии и иммунофлюоресции.
4.9. Метод обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (RT-PCR).
4.10. Определение уровня продукции цитокинов методом ELISA.
4.11. Статистическая обработка данных.
Глава 5. Результаты.
5.1. Экспрессия TLR в эпителии тонкого и толстого кишечника человека
5.1.1. Субпопуляция. кишечного эпителия ко-экспрессирует TLR1, TLR2HTLR4 46
5.1.2. Клетки кишечного эпителия, экспрессирующие TLR1, TLR2
и TLR4, морфологически однородны и принадлежат к энтероэндокринной линии 52
5.2. Функциональные взаимодействия между TLR1, TLR2 и TLR4 .
5.2.1. Совместная экспрессия TLR1 и TLR2 ведет к физическому взаимодействию двух молекул
5.2.2. Функциональная синергия между TLR1 и TLR2 67
5.3. Биологическая роль TLR в кишечном эпителии.
5.3.1. Модель функцональных рецепторных комплексов TLR1/TLR2, TLR2/TLR6 и TLR4/MD4 на основе клеточной линии эпителия кишечника человека САСО-2 72
5.3.2. TLR1/TLR2, TLR2/TLR6 и TLR4/MD2 дифференцируют между Грам-отрицательными и Грам-положительными бактериальными патогенами 80
5.3.3. TLR4/MD2 и TLR1/TLR2 обладают специфичностью к разным составляющим грам-отрицательных бактерий 84
5.3.4. Кишечная микрофлора активирует TLR1/TLR2, TLR2/TLR6 и TLR4/MD2 94
5.3.5. Стимуляция эпителиальных TLR1/TLR2, TLR2/TLR6 и TLR4/MD2 ведет к продукции провоспалительных хемокинов 98
ЧАСТЬ III. Обсуждение результатов 105
Выводы 115
Список литературы
