Введение
Глава 1. Гликолипиды и гликоконъюгаты как маркеры опухолей человека. Ганглиозид FucGM 1 11
Глава 2. Роль ганглиозидов в межклеточных взаимодействиях 27
2.1. Гликосинапс первого типа 28
2.2 Гликосинапс второго типа 31
2.3 Гликосинапс третьего типа 32
Глава 3. Моноклональные антитела для диагностики опухолей 36
3.1. Опухолеассоциированные антигены в сыворотке 39
3.2. Локализация опухолей и метастазов 42
3.3 Патогистологическая диагностика опухолей 46
3.4. Иммунотерапия опухолей 51
Глава 4. Материалы и методы 55
4.1. Культивирование клеток 55
4.2. Среды и реактивы 55
4.2.2.Антигены и моноспецифические антитела к ним 56
4.2.2.1. FucGM-1 и другие ганглиозиды 56
4.2.2.2. Очистка моноклональных антител 58
4.3. Процедура иммуноферментного анализа (ИФА) 58
4.3.1. Непрямой ИФА 58
4.3.2. Процедура прямого ИФА 61
4.3.3. Процедура "сэндвич" ИФА 61
4.4. Определение константы связывания MAT 61
4 5. Изотипирование MAT 62
4.6. Получение гибридом 63
4.7. Радиоиммунологическое выявление гликолипидного антигена на тонкослойных пластинах 65
4.8. Хромосомный анализ гибридом против FucGM 1 66
4.8.1. Использованные клеточные линии 66
4.8.2. Культивирование клеток 66
4.8.3. Сбор клеток и приготовление хромосомных препаратов 67
4.8.4. Окраска хромосомных препаратов 68
4.9. Иммуноморфологические исследования 68
4.10. Статистическая обработка результатов 69
Глава 5. Получение и исследование МАТ против ганглиозида FucGMl 69
5.1. Тестирование иммунного ответа мышей 69
5.2. Получение гибридом 69
5.3. Тестирование моноклональных антител методом ИФА 72
5.4. Характеристика моноклональных антител 76
5.4.1. Изотипирование МАТ 76
5.4.2. Измерение концентрации МАТ 81
5.4.3. Определение специфичности МАТ против FucGM 1 85
5.5. Хромосомный анализ гибридом 91
Глава 6. Выявление FucGM-1 в сыворотке крови и тканях онкологических больных 98
6.1. Выявление FucGM-1 в опухолях легкого 98
6.1.1. Анализ ганглиозидного состава опухолей легкого 98
6.1.2. Иммунофлуоресцентное исследование опухолей и других FucGM-1 содержащих тканей 103
6.2. Исследование FucGMl в сыворотке больных раком легкого 108
6.2.1. Радиоиммунохроматографическии анализ FucGM-І в сыворотке больных мелкоклеточным раком легких 108
6.2.2. Фукозилтрансферазная активность сывороток больных мелкоклеточным раком легких 109
6.3. Разработка клеточного ИФА с МАТ против ганглиозида FucGM-1. 110
6.3.1. Антилипидные и анти-FucGM-l антитела в сыворотке больных мелкоклеточным раком легкого 112
Обсуждение 118
Выводы 132
Список литературы 134
