Введение
Глава 1. Теломераза человека и ее регуляция 12
1.1. Роль теломеразы в проблеме концевой недоренликации хромосом 12
1.2. Состав теломеразного комплекса 17
1.2.1. Каталитическая субъединица теломеразы 17
1.2.2. РНК-субъединица теломеразы 19
1.3. Регуляция активности теломеразы 20
1.3.1. Транскрипционная регуляция hTERT 20
1.3.2. Посттранскрипционная регуляция теломеразы 21
Глава 2. Механизмы регуляции теломеразы в норме и при патологии 24
2.1. Регуляция теломеразы в иммунокомпетентных клетках человека 27
2.1.1. Лимфоидные клетки 28
2.1.2. Миелоидные клетки 34
2.2. Теломераза при различных иммунопатологических состояниях 35
2.2.1. Активность теломеразы при ревматоидном артрите 35
2.2.2. Активность теломеразы при системной красной волчанке 37
2.2.3. Активность теломеразы при рассеянном склерозе 38
2.2.4. Активность теломеразы при атопическом дерматите и псориазе 39
2.2.5. Активность теломеразы при апластической анемии 40
Часть II. Материалы и методы исследования 43
Часть III. Результаты собственных исследований 53
Глава 1. Постановка метода оценки мРНК hTERT в имунокомпетентных клетках с помощью Flow-FISH 53
1.1. Проверка специфичности используемого PNA зонда 53
1.2. Разработка условий гибридизации in situ 57
1.2.1. Выделение и подготовка клеточных образцов 57
1.2.2. Денатурация нуклеиновых кислот 58
1.2.3. Гибридизация 59
1.2.4. Удаление не связавшегося зонда из клеток 62
1.2.5. Окрашивание ДНК 63
1.2.6. Запись и анализ данных 63
1.2.7. Воспроизводимость метода Flow-FISH 67
1.3. Демонстрация метода гибридизации in situ 68
Глава 2. Экспрессия теломеразы в интактных и стимулированных лимфоцитах человека в норме и при иммунопатологических состояниях 70
2.1. Экспрессия мРНК hTERT в интактных лимфоцитах 70
2.2. Содержание субъединицы hTERT в интактных лимфоцитах 71
2.3. Экспрессия мРНК hTERT в стимулированных лимфоцитах 72
2.4. Содержание hTERT в стимулированных лимфоцитах 75
2.5. Содержание hTERT и мРНК hTERT в CD4 и CD8 субпопуляциях лимфоцитов 78
2.6. Исследование активности теломеразы в лимфоцитах при поликлональной стимуляции 80
Обсуждение 85
Заключение 99
Выводы 101
Список литературы 103
