Введение
Обзор литературы 13
1.1. Грипп птиц - общая эпидемиологическая характеристика 13
1.2. Структура и функция вириона 18
1.3. Факторы патогенности вирусов гриппа А 23
1.4. Факторы резистентности вирусов гриппа А к противовирусным препаратам 32
1.5. Эволюция вирусов гриппа А 33
1.6. Методы диагностики гриппа птиц 38
1.7. Методы типирования вирусов гриппа птиц 43
1.8. Заключение 48
Собственные исследования 51
2.1. Материалы и методы исследований 51
2.1.1. Разработка тест-систем для обнаружения и типирования вирусов гриппа птиц методом ПЦР 51
2.1.1.1. Штаммы микроорганизмов, использованные в работе 51
2.1.1.2. Биологический материал, использованный в работе 52
2.1.1.3. Проведение ПЦР-анализа 53
2.1.1.4. Клонирование РНК в фаг MS22 68
2.1.2. Проведение молекулярно-генетического анализа 75
2.1.2.1. Экстракция РНК 75
2.1.2.2. Проведение реакции обратной транскрипции 76
2.1.2.3. ПЦР-амплификация фрагментов кДНК сегментов вирусов гриппа А 77
2.1.2.4. Очистка фрагментов ПНР 79
2.1.2.5. Секвенирование ДНК 80
2.1.2.6. Проведение филогенетического анализа 80
2.2. Результаты исследований 84
2.2.1. Разработка тест-систем для обнаружения и типирования вирусов гриппа птиц 84
2.2.1.1. Создание положительных контрольных образцов РНК (ПКО) 84
2.2.1.2. Выбор оптимальных параметров ПНР 90
2.2.1.3. Создание внутреннего контрольного образца РНК (ВКО)...96
2.2.1.4. Оценка аналитических характеристик тест-систем 100
2.2.1.5. Определение диагностической чувствительности тест-систем : 115
2.2.1.6. Сравнительная характеристика разработанных тест-систем и методик, рекомендуемых ВОЗ 119
2.2.2. Молекулярно-генетический анализ штаммов вируса высоко патогенного гриппа птиц 122
2.2.2.1. Анализ маркеров патогенности 122
2.2.2.2. Анализ резистентности к противовирусным препаратам... 126
2.2.2.3. Проведение молекулярно-генетического анализа родства изолятов вируса гриппа птиц 128
2.2.3. Молекулярно-эпидемиологический анализ вспышки гриппа птиц в частных хозяйствах Московской области 132
Обсуждение 140
Выводы 145
Практические рекомендации 146
Литература 147
Приложения
