Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. основные принципы структурной организации лейкоцитарных рецепторов 9
1.1.1. Структура ИГ-домена 11
1.1.2. Прикрепление лейкоцитарных поверхностных молекул к клеточной мембране 13
1.1.3. Гликозилирование лейкоцитарных рецепторов 16
1.1.4. Сигнальные мотивы в цитоплазматических районах лейкоцитарных рецепторов 16
1.1.4.1. Активирующие IT AM мотивы 17
1.1.4.2. Ингибирующие ITIM мотивы 20
1.1.4.3. Дуализм среди IT AM- и ГПМ-содержащих рецепторов 21
1.2. Fc-рецепторы млекопитающих 22
1.2.1. Лейкоцитарные Fc-рецепторы человека и мыши 23
1.2.2. Лиганд-специфичность, аффинность связывания ИГ FcR 28
1.2.3. Структура рецепторных комплексов лейкоцитарных FcR человека, сигнальные субъединицы 31
1.2.4. Активация и инактивация клеток Fc-рецепторными комплексами человека 32
1.3. Эволюция семейства лейкоцитарных FcR 37
2. Материалы и методы 40
2.1. Материалы и реактивы 40
2.2. Биологический материал 40
2.3. кДНК и кДНК библиотеки 41
2.4. Нуклеотидные последовательности кДНК 41
2.5. Выделение и очистка нуклеиновых кислот 42
2.5.1. Выделение ДНК 42
2.5.2. Выделение суммарной РНК из эукариотических клеток 43
2.6. Методы, используемые для клонирования ДНК-фрагментов 44
2.6.1. Основные методы клонирования ДНК 44
2.6.2. Химическая трансформация Е. coli 44
2.6.3. Электротрансформация 45
2.7. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и олигонуклеотиды 45
2.8. Определение нуклеотидной последовательности 48
2.9. Скрининг кДНКовой библиотеки ДНК-зондами 49
2.10. Эксцизия in vivo плазмидной ДНК из фагового вектора 50
2.11. Саузерн блот-гибридизация ДНК 50
2.12. Компьютерный анализ последовательностей 51
2.13. Построение филогенетических деревьев 52
3. Результаты и обсуждение 53
3.1. Идентификация и структурный анализ FcR-подобных кДНК человека и мыши ; 53
3.1.1. Определение нуклеотидных последовательностей и структурный анализ FCRL1 кДНК человека и мыши 53
3.1.2. Саузерн блот-анализ геномной ДНК человека и мыши с использованием FCRLl-специфичных зондов 54
3.1.3. Определение нуклеотидных последовательностей и структурный анализ IFGP кДНК человека и мыши 54
3.1.4. Саузерн блот-анализ геномной ДНК человека и мыши с использованием IFGP-специфичных зондов 57
3.1.5. Получение полных кДНК IFGP1,2 и 3 и FCRL2 человека 58
3.2. Компьютерный анализ геномных последовательностей человека и мыши, предоставленных центром Сэнгера 59
3.2.1. Определение взаимного расположения FCRL и IFGP генов у человека и мыши 59
3.2.2. Определение экзон-интронной организации FCRL и IFGP генов человека и мыши 59
3.3. Сравнительный анализ первичной структуры IFGP и FCRL 64
3.3.1. Сравнительный анализ первичной структуры ИГ-доменов
IFGP и FCRL 64
3.3.2. Сравнительный анализ первичной структуры цитоплазматических районов IFGP 73
3.4. Идентификация FcR-подобных генов у Ictalums punctatus, Danio rerio и Xenopus laevis 75
3.4.1. Определение нуклеотидных последовательностей и структурный анализ FcR-подобных кДНК X. laevis (XFL) 76
3.4.2. Саузерн блот-анализ геномной ДНК X. laevis с ипользованием XFL- специфичных зондов 77
3.4.3. Поиск кДНК XFL с помощью скрининга кДНК библиотек Xenopus LG 78
3.4.4. Структурный анализ идентифицированных FcR-подобных кДНК Xenopus LG 80
3.5. Сравнительный анализ первичной структуры XFL 82
3.5.1. Сравнительный анализ первичной структуры ИГ-доменов XFL 82
3.5.2. Сравнительный анализ первичной структуры цитоплазматических районов XFL 87
Заключение 89
Выводы 93
Приложения 95
Список литературы 103
