Введение
Глава 1. Обзор литературы ...10
1.1. Механизмы регенерации тканей 10
1.1.1. Особенности заживления кожных ран 13
1.1.2. Особенности заживления язвы желудка 15
1.2. Покрытия для терапии ран 17
1.3. Биологически активные вещества, ускоряющие репарацию тканей 20
1.3.1. Факторы роста 21
1.3.2. Тромбин 22
1.3.3. Пептиды, имитирующие действие тромбина 25
1.4. Системы доставки БАВ и методы их получения 27
1.4.1. Микрочастицы и микрокапсулы 28
1.4.2. Методы капсулирования БАВ в биосовместимые полимерные микрочастицы и микрокапсулы 30
1.4.2.1. Метод простой эмульсии (В/М) 31
1.4.2.2. Метод двойной эмульсии (ТВ/М/В) 33
1.4.2.3. Метод двойной эмульсии (Ві/МУВ2) 33
1.4.3. Полимерные материалы для капсулирования БАВ 35
1.4.3.1. Сополимеры молочной и гликолевой кислот 35
1.4.3.1.1. Основные характеристики PLGA 37
1.4.3.1.2. Механизм и особенности деструкции PLGA 38
1.4.3.1.3. Механизм выделения БАБ из PLGA микрочастиц 40
1.5. Заключение 42
Глава 2. Экспериментальая часть 43
2.1. Материалы 43
2.1.1. Реагенты 43
2.1.2. Буферные растворы 43
2.1.3. Растворители 43
2.2. Лабораторное оборудование 44
2.3. Методы 1 45
2.3.1. Капсулирование пептидов методом двойной эмульсии (Bi/M/B2) 45
2.3.2. Капсулирование пептидов методом простой эмульсиии (В/М) 47
2.3.3. Исследование стабильности двойной эмульсии и
распределения микрочастиц по размерам 47
2.3.4. Получение образцов для исследований 48
2.3.4.1. Получение образцов для исследования скорости деструкции PLGA микрочастиц 48
2.3.4.2. Получение образцов для исследования кинетики выхода пептидов и их адсорбции/десорбции на/с поверхности PLGA микрочастиц 48
2.3.4.3. Получение образцов для исследования биологической активности пептидов 49
2.3.4.4. Получение образцов для исследования влияния межфазной поверхности вода/органический растворитель на биологическую активность TRAP-6 50
2.3.4.5. Получение образцов для исследования влияния межфазной поверхности вода/органический растворитель на адсорбцию TRAP-6 на твердых поверхностях 52
2.3.5. Исследование скорости деструкции PLGA микрочастиц 53
2.3.6. Исследование кинетики выхода пептидов и их адсорбции/десорбции на/с поверхности PLGA микрочастиц...53
2.3.7. Исследование биологической активности пептидов 54
2.3.8. Исследование эффектов инкапсулированных пептидов на процесс заживления кожных ран у мышей 55
2.3.9. Исследование эффектов инкапсулированных пептидов на процесс заживления язвы желудка у крыс 56
Глава 3. Обсуждение результатов 57
3.1. Выбор биологически активных пептидов 57
3.1.1. Исследование биологической активности пептидов методом агрегации тромбоцитов 60
3.1.1.1. Оптимизация метода 61
3.1.1.2. Исследование биологической активности TRAP-6 и TRAP-6(M) 65
3.2. Выбор биосовместимого полимера для капсулирования пептидов 66
3.3. Капсулирование пептидов методом двойной эмульсии (Ві/М/Вз) 67
3.3.1 Оптимизация метода 67
3.3.2. Исследование стабильности двойной эмульсии 70
3.3.3. Исследование физико-химических свойств PLGA микрочастиц 72
3.3.3.1. Исследование морфологии поверхности PLGA микрочастиц 72
3.3.3.2. Исследование распределения по размерам PLGA микрочастиц 75
3.3.4. Исследование скорости деструкции PLGA микрочастиц 76
3.3.5. Исследование пептидов методом ВЭЖХ 78
3.3.5.1. Оптимизация метода 78
3.3.5.2. Исследование кинетики выхода пептидов из PLGA микрочастиц 86
3.3.5.3. Исследование адсорбции/десорбции пептидов на/с поверхности PLGA микрочастиц 88
3.3.6. Исследование некоторых факторов, влияющих на потери пептидов в процессе микрокапсулирования 90
3.3.6.1. Исследование влияния межфазной поверхности вода/органический растворитель на биологическую активность TRAP-6 91
3.3.6.2. Исследование влияния межфазной поверхности вода/органический растворитель на адсорбцию TRAP-6 93
3.4. Капсулирование пептидов методом простой эмульсии (В/М) 96
3.5. Исследование эффектов инкапсулированных пептидов на процесс репарации тканей in vivo 97
3.5.1. Исследование эффектов инкапсулированных пептидов на процесс заживления кожных ран у мышей 98
3.5.2. Исследование эффектов инкапсулированных пептидов на процесс заживления язвы желудка у крыс 101
Выводы 106
Благодарности 107
Литература 108
