Введение
2 Обзор литературы 11
2.1 Молекулярная структура белков и олигопептидов 11
2.1.1 Взаимодействие амфипатических олигопептидов с мембранами 19
2.2 Проникновение невирусных векторов в клетку 20
2.2.1 Комплексообразование и компактизация ДНК 22
2.2.2 Связывание с поверхностью клетки 28
2.2.3 Транспорт в ядро клетки 32
2.3 Носители ДНК в генной терапии 35
2.3.1 Использование катионных липидов в качестве носителей ДНК 36
2.3.2 Катионные полимеры как носители ДНК 38
2.3.3 Использование катионных олигопептидов как носителей ДНК 42
3 Обсуждение результатов 46
3.1 Синтез пептидов 46
3.1.1 Синтез пептидов FP, FP1 и FP4 51
3.1.2 Синтез пептидов N2 HRN2 55
3.1.3 Синтез пептидов N4 HRN4 59
3.2 Изучение вторичной структуры пептидов методом кругового дихроизма 67
3.3 Исследование структуры и размеров комплексов синтезированных пептидов с ДІЖ методом электронной микроскопии 79
3.4 Исследование комплексообразования и защиты ДНК от нуклеазного расщепления методом гель-электрофореза 81
3.5 Исследование гемолитической активности пептидов 85
3.6 Исследование эндосомолитических свойств пептидов FP1HFP4 88
3.7 Взаимодействие пептидов с аденилатциклазной системой клетки 90
Экспериментальная часть 96
4.1 Материалы 96
4.2 Оборудование 97
4.3 Методы 98
4.3.1 Синтез пептидов FP, FP1, FP4, JTS-1, N2, RN2, N4, RN4 98
4.3.2 Спектроскопия кругового дихроизма 102
4.3.3 Электронная микроскопия комплексов пептид-ДНК 103
4.3.4 Получение комплексов пептид-ДНК и изучение их устойчивости к ферментативному расщеплению методом гель-ретардации (DNase I protection assay) 103
4.3.5 Определение гемолитической активности 104
4.3.6 Оценка эффективности трансфекции комплексами пептид pCMV-nlsLacZ 104
4.3.7 Изучение влияния пептидов на аденилатциклазную систему 106
5 Выводы 107
6 Список литературы 109
Приложение 1 а-Аминокислоты, входящие в состав белков 124
