Введение
I. Обзор литературы 10
1.1. Структура эпидермиса 10
1.1.1. Эпидермалъная пролиферативная единица 10
1.1.2. Базальная мембрана 13
1.1.3. Цитокератины 14
1.2. Клеточные контакты кератиноцитов 16
1.2.1. Плотные контакты 16
1.2.2. Заякоривающие контакты 17
1.2.3. Коммуникационные контакты 19
1.3. Волосяной фолликул как производное кожи 20
1.4. Стволовая эпидермальная клетка 21
1.4.1. Ниша стволовых клеток. 21
1.4.2. Характеристика стволовых клеток 24
1.4.3. Кератин 19-положительные клетки 29
1.5. Мезенхимные клетки волосяного фолликула 30
1.6. Особенности культивирования клеток эпидермиса 36
1.6.1. Формирование культуры кератиноцитов 36
1.6.2. Адгезия кератиноцитов к субстрату 38
1.6.3. Действие различных субстратов и их использование при культивировании кератиноцитов 39
1.6.4. Трансплантация выращенных в культуре эпидермальных пластов. 40
1.6.5. Влияние факторов роста. 41
1.6.6. Сохранение стволовых клеток в культуре 42
1.6.7. Использование трехмерных гелей в культивировании эпителиальных клеток 43
1.7. Взаимодействие кератиноцитов и фибробластов 45
1.8. Морфогенез эпителия 47
1.8.1. Тубулогенез как пример морфогенеза 47
1.8.2. Механизм формирования тубулярных структур 48
1.8.3. Влияние различных факторов на морфогенез 52
1.8.4. Модель для изучения морфогенеза эпителиальных клеток 54
II. Материалы и методы 56
11.1. Материалы 56
Ц.1.1. Клеточные культуры 56
П.1.2. Химические реактивы 56
II.2. МЕТОДЫ 59
II.2.1. Выделение первичных кератиноцитов человека 59
П.2.2. Культивирование кератиноцитов на пластике... 59
П.2,3. Получение базальних кератиноцитов 60
П.2.4. Выделение клеток интерфолликулярного эпидермиса 60
П.2.5. Выделение и культивирование постнатальных фибробластов человека 61
11.2.6. Выделение и культивирование эмбриональных фибробластов человека 61
11.2.7. Выделение клеток дермальной папиллы человека 62
П.2.8. Выделение клеток ДП вибрисс крысы 62
11.2.9. Новый метод выделение клеток ДП 62
11.2.10. Получение сред, кондиционированных фибробластами 63
11.2.11. Гистохимическое окрашивание 64
П.2.12. Индукция и детекция остео- и адипогенной дифференцировок 64
П.2.13. Выделение коллагена из хвостов крыс 65
11.2.14. Обработка стекол субстратами... 66
П.2.15. Обработка клеток митомицином С. 66
11.2.16. Приготовление коллагенового геля 66
11.2.17. Иммуногистохимическое исследование 67
П.2.18. Культивирование кератиноцитов на поверхности коллагенового геля 68
11.2.19. Культивирование кератиноцитов в коллагеновом геле 68
П.2.20. Электронная микроскопия 70
11.2.21. Мечение клеток лентивирусом 70
11.2.22. Трансплантация клеток иммунодефицитным мышам... 71
П.2.23. Выявление BrdU-меченных клеток. 71
11.2.24. Выявление активности щелочной фосфатази. 72
П.2.25. Изучение влияния различных факторов на поведение базальних
кератиноцитов 72
11.2.26. Статистическая обработка результатов 72
Ш. Результаты исследований 74
III. 1. Стволовые клетки 75
П1.1.1. Экспрессия кератина 19 75
111.1.2. Влияние кальция на экспрессию кератина 19 78
111.1.3. Пролиферация К19+-клеток 79
П1.1.4. Экспрессия кератина 19 в базальних кератиноцитах. 81
111.1.5. Ингибирование пролиферации кератиноцитов митомицином С. 82
111.1.6. Культивирование клеток интерфолликулярного эпидермиса 83
Ш.2. Культивирование и характеристика клеток ДП 85
П1.2.1. Разработка метода выделения клеток ДП 85
111.2.2. Культивирование клеток ДП. 87
Ш.2.3. Идентификация клеток ДП, 89
П1.2.4. Активность щелочной фосфатазы в клетках ДП 91
ІП.2.5. Остео- и адипогенная дифференцировки клеток ДП. 91
111.2.6. Изучение индуктивных свойств клеток ДП 95
Ш.2.7. Индуктивные свойства иммортализованных клеток ДП 98
1П.2.8. HGF/SF- индуктор морфогенеза 99
Ш.З. Структура эпидермальных выростов 102
Ш.3.1. Гистология тубулярных структур 102
Ш.3.2. Электронная микроскопия 102
Ш.3.3. Флуоресцентная микроскопия 105
Ш.4. Способность кератиноцитов к самоорганизации 107
Ш.5. Изучение способности клеток встраиваться в трехмерные 109
структуры кожи in vivo 109
III.S.1. Трансдукция клеток лентивирусными частицами in vitro. 110
ІП.5.2. Трансплантация клеток в систему in vivo 112
IV. Обсуждение результатов 114
V. Заключение , 139
Выводы 142
Список литературы
