Введение
ЧАСТЬ I. Обзор литературы 16
ГЛАВА I. Паттерн-распознающие рецепторы врожденного иммунитета 16
1.1. Характеристика паттерн-распознающих рецепторов 1-6
1.2. Характеристика Toll-подобных рецепторов
1.2.1. Строение Toll-подобных рецепторов 32
1.2.2. Функции Toll-подобных рецепторов 34
1.2.3. Сигнальные пути Toll-подобных рецепторов 38
1.2.4.Экзогенные лиганды Toll-подобных рецепторов 44
1.2.5.Эндогенные лиганды Toll-подобных рецепторов 50
1,2.6.Эндогенные лиганды в патогенезе заболеваний человека 65
1.2.7.Роль Toll-подобных рецепторов в развитии патологии 68
Toll-подобные рецепторы при иммунодефицитных заболеваниях 69
Toll-подобные рецепторы в развитии сердечно-сосудистых заболеваний 74
Toll-подобные рецепторы в развитии острого панкреатита 83
ГЛАВА II. Материалы и методы исследования 89
2.1. Характеристика групп обследованных больных 89
2.2. Реактивы 94
2.3. Методы исследования 96
2.3.1 .Оценка эффекторной функции TLR 96
Выделение МНК из периферической крови человека 96
Культивирование МНК периферической крови человека 96
2.3.2. Определение концентрации цитокинов в культуральных супернатантах методом иммуноферментного анализа 99
2.3.3.Оценка экспрессии TLR на моноцитах периферической крови 101
2.3.4.0ценка экспрессии мРНК TLR в МНК периферической крови 104
2.3.4.1. Методы выделения РНК из МНК 104
2.3.4.2.Проведение реакции обратной транскрипции 106
2.3.4.3.Постановка ПНР в реальном времени, метод AAct 106
2.3.5. Статистическая обработка результатов 112
Результаты и обсуждение 114
ГЛАВА III. Оценка эффекторной функциональной активности TLR на МНК периферической крови человека 114
3.1. Определение эффекторной функциональной активности TLR по выработке ФНОа 114
3.2.Исследование влияния лигандов TLR на выработку ИФНа МНК здоровых людей 124
3.3 Оценка эффекторной функции TLR у здоровых людей разных возрастных групп 127
ГЛАВА IV. Анализ системы TLR у больных первичными иммунодефицитами 130
4.1 .Оценка эффекторной функции TLR на МНК больных с дефектами антителообразования 130
4.1.1. Определение спонтанной продукции ФНОа МНК периферической крови больных ОВИН и Х-АГГ 131
4.1.2.Определение стимулированной лигандами TLR продукции ФНОа МНК больных ОВИН и Х-АГГ 133
4.1.3.Исследование влияния лигандов Toll-подобных рецепторов на выработку ИФНа МНК больных ПИД с дефектами
антителообразования 140
4.1.4.Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на поверхности моноцитов периферической крови больных ПИД с дефектами
антителообразования 143
4.1.5.0ценка экспрессии мРНК TLR2 и TLR4 в МНК периферической крови больных ПИД с дефектами антителообразования 148
4.2,Оценка показателей системы TLR в МНК периферической крови детей с нейтропенией 153
4.2.1.Определение эффекторной функции TLR на МНК периферической крови больных нейтропенией 153
4.2.2.Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на поверхности моноцитов периферической крови больных нейтропенией 160
ГЛАВА V. Анализ системы TLR в МНК периферической крови больных при острых патологических состояниях, сопровождающихся деструкцией ткани 162
5.1.Оценка компонентов системы TLR у больных острым инфарктом миокарда 163
5.1.1.Оценка эффекторной функции TLR2 и TLR4 на МНК больных острым инфарктом миокарда 163
5.1.2. Изучение влияния rHSP70 на функциональную активность TLR4 на МНК здоровых доноров и больных ОИМ 167
Исследование совместного действия лигандов TLR2 и TLR4 на выработку ФНО а МНК здоровых доноров in vitro 169
5.1.3. Особенности TLR индуцированной выработки ФНОа МНК у отдельных больных ОИМ в динамике заболевания 172
5.1.4.Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на моноцитах больных острым инфарктом миокарда 174
5.2.Оценка компонентов системы TLR в мононуклеарных клетках периферической крови больных острым деструктивным
панкреатитом 177
5.2.1.Оценка эффекторной функции TLR2 и TLR4 у больных ОДП в динамике заболевания 178
5.2.1.1.Определение спонтанной выработки провоспалительных цитокинов у больных ОДП 178
Изучение влияния препарата Лорноксикам на опосредованную TLR 1/2 и TLR 4 выработку провоспалительных цитокинов МНК здоровых доноров in vitro 182
5.2.1.2.Определение спонтанной выработки провоспалительных цитокинов у больных, получающих Лорноксикам 185
Определение индуцированной лигандами TLR2 и TLR4 выработки провоспалительных цитокинов МНК больных ОДП. 189
5.2.2.Оценка экспрессии TLR2 и TLR4 на моноцитах больных ОДП в динамике заболевания 194
5.2.3. Анализ экспрессии мРНК TLR2 и TLR4 в мононуклеарных клетках больных ОДП 196
5.2.4.Изменения показателей в системе TLR у больных ОДП с развитием гнойно-деструктивных осложнений 205
ГЛАВА VI. Заключение 221
Выводы 244
Список литературы
