Введение
1. Котрансляционное сворачивание белков 9
1.1. Гипотеза Анфинсена 9
1.2. Гипотеза котрансляционного сворачивания белков 10
1.3. Котрансляционное формирование ферментативно и иммунологически активной конформации 14
1.4. Котрансляционное образование дисульфидньгх связей 16
1.5. Связывание лигандов растущими полипептидными цепями 19
1.6. Котрансляционное формирование устойчивых к протеолизу доменов растущего белка 21
1.7. Котрансляционная олигомеризация растущих цепей 23
1.8. Ферментативная активность синтезированных белков после высвобождения из рибосомы 24
1.9. Ферментативная активность белков, связанных с рибосомой 26
1.10. Котрансляционное сворачивание белков в клетках про- и эукариот 27
2. Люцифераза светлячка PHOTINUS PYRALIS 31
2.1. Свойства фермента 31
2.2. Люцифераза как объект исследований сворачивания белков 35
3. Рибосомный канал для растущего полипептида 37
3.1. Визуализация внутририбосомного туннеля методом криоэлектронной микроскопии 40
3.2. Визуализация внутририбосомного туннеля с помощью рентгеноструктурного анализа 44
3.3. Величина скрытого в рибосоме участка растущего полипептида 46
3.4. Конформация пептида в рибосомном канале 51
3.5. Форма рибосомного канала: туннель или желоб 52
3.6. Резюме 59
4. Сворачивание светлячковои люциферазы в процессе синтеза в бесклеточной системе 61
4.1. Синтез активной люциферазы в бесклеточной системе из зародышей пшеницы 61
4.2. Координированное накопление полноразмерного полипептида люциферазы и нарастание её ферментативной активности 64
4.3. Длительность пост-трансляционной фазы сворачивания синтезированной de novo люциферазы 68
5. Ренатурация светлячковои люциферазы из полностью развёрнутого состояния 70
5.1. Кинетика ренатурации люциферазы в эукариотическом цитозоле 70
5.2. Вклад цис-транс изомеризации Х-Про пептидных связей в скорость ренатурации люциферазы 71
6. Энзиматическая активность связанного с рибосомой растущего полипептида 74
6.1. Приобретение энзиматически активной конформации люциферазы при выходе полипептида из рибосомы 74
6.2. Экспонированность синтезируемого полипептида на поверхности рибосомы 76
6.3. Синтез люциферазы с С-концевым удлинением в бесклеточной системе трансляции 81
6.4. Энзиматическая активность удлинённой люциферазы, связанной с 80S рибосомой 83
7. Котрансляционное сворачивание люциферазы в прокариотическом и эукариотическом цитозоле 87
7.1. Накопление полноразмерной люциферазы и её ферментативно активной формы при синтезе фермента в бактериальной бесклеточной системе трансляции 88
7.2. Длительность пост-трансляционной фазы сворачивания люциферазы, синтезированной в бактериальной системе трансляции 90
7.3. Кинетика ренатурации люциферазы в прокариотическом цитозоле 91
7.4. Энзиматическая активность растущего полипептида люциферазы на бактериальной рибосоме 93
7.5. Скорость перехода от неактивной к энзиматически активной конформации полипептидной цепи люциферазы на рибосоме 95
7.6. Удельная ферментативная активность люциферазы, синтезированной в различных бесклеточных системах трансляции 97
7.7. Влияние молекулярных шаперонов семейств GroEL и DnaK на котрансляционпое сворачивание люциферазы 99
Заключение 102
