Введение
Глава 1. Аллогенные клапаны в сердечно-сосудистой хирургии (обзор литературы) 13
1. Применение аортальных и легочных аллогенных клапанов в сердечнососудистой хирургии 13
1.1. Первые пересадки аллогенных клапанов 13
1.2. Использование аллогенных клапанов, хранившихся в питательной среде 14
1.3. Начало использования аллографтов 18
1.4. Использование митральных аллографтов 20
2. Различные варианты технологической схемы изготовления аллографтов 24
2.1. Критерии отбора доноров 24
2.2. Забор и транспортировка донорского сердца и сосудов 24
2.3. Выделение клапанных и сосудистых аллографтов 25
2.4. Стерилизация аллографтов 27
3. Биологические аспекты криосохранения 29
3.1. Влияние замораживания на жизнеспособность клеток аллографта 29
3.2. Виды криопротекторной смеси 32
4. Биологические аспекты размораживания. Влияние скорости размораживания на жизнеспособность тканей аллографтов 33
5. Гистологическая и биохимическая структура клапанов сердца. Предпосылки развития кальциноза в имплантированном аллографте 34
6. Контроль качества аллографтов 36
7. Правовые, технологические и биологические проблемы при организации производства аллографтов 38
7.1. Организационные вопросы по изготовлению аллографтов 38
7.2. Контроль качества изъятых органов и тканей 40
7.3. Контроль стерильности готовых аллографтов 40
7.4. Биологические проблемы при имплантации аллографтов. Иммунитет 41
7.5. Жизнеспособность клеток аллографта 43
7.6. Кальцификация аллографтов 44
7.7. Проблема механической прочности аллографтов 47
8. Применение аллографтов в клинике приобретенных пороков сердца 48
9. Применение аллографтов в клинике врожденных пороков сердца 51
10. Применение артериальных и венозных аллографтов 53.
Глава 2. Технология изготовления криосохраненных клапанных аллографтов 55
1. Критерии отбора доноров 55
2. Методика забора ткани 56
3. Выделение клапанных аллографтов 58
4. Стерилизация аллографтов 60
5. Криосохранение 62
6. Хранение аллографтов 67
7. Транспортировка и подготовка к имплантации 67
8. Контроль качества аллографтов 69
9. Технология изготовления венозных аллографтов 72
Глава 3. Материал и методы исследования 75
1. Изучение жизнеспособности клеточных элементов клапанов 75
2. Выращивание культуры фибробластов 80
3. Девитализация аллографтов 80
4. Иммунолюминесцентный анализ гладкомышечных клеток 83
5. Определение упруго-прочностных свойств аллографтов 83
6. Оценка влияния криосохранения на гистологическую структуру аллографтов 84
7. Определение эффективности методов антикальциевой защиты аллографтов на модели подкожной имплантации 85
8. Цитотехнологическая модификация аллографтов клетками реципиента 85
9. Материал и методы клинического исследования 86
9.1. Клиническое применение аллографтов у больных с аортальным пороком 86
9.2. Клиническое применение аллографтов у больных с инфекционным эндокардитом трикуспидального клапана 88
9.3. Клиническое применение аллографта у больного с инфекционным эндокардитом митрального клапана 90
9.4. Клиническое применение аллографтов у больных с врожденными пороками сердца 91
10. Статистическая обработка результатов 92
Глава 4. Влияние технологии изготовления аллографтов на параметры жизнеспособности ткани 93
1. Исследование повреждающего действия длительного хранения аллографтов в питательной среде 95
2. Исследование влияния стерилизации на аллографты 99
3. Исследование влияния криосохранения на аллографты 103
4. Обсуждение полученных результатов 107
Глава 5. Влияние замораживания и размораживания на целостность структуры и механические свойства аллографтов 113
1. Влияние режимов криосохранения на гистологическую структуру аллографтов 113
2. Изучение влияния температуры размораживания на целостность криосохраненных аллографтов 119
3. Влияние криосохранения на упруго-прочностные свойства аллографтов 129
Глава 6. Иммунология аллографтов 132
Глава 7. Клиническое применение аллографтов у больных с приобретенными и врожденными пороками сердца 135
1. Операционные находки и техника операции у больных с приобретенными пороками сердца. 135
1.1. Использование аллографтов у больных с аортальным пороком 135
1.2. Результаты операций у больных с аортальным пороком и их обсуждение 140
2. Применение аллографтов у пациентов с инфекционным эндокардитом трикуспидального клапана. (Хирургическая техника имплантации, данные клинического обследования пациентов и результаты лечения) 148
3. Применение аллографтов при хирургическом лечении врожденных пороков сердца 159
3.1. Операционные находки и техника операций 159
3.2. Результаты и обсуждение 162
4. Клиническая апробация методики аллотрансплантации криосохраненного клапаносодержащего венозного аллографта 167
Глава 8. Результаты девитализации тканей апоптотическими и некротическими веществами 172
1. Изучение гибели клеток при обработке девитализирующими агентами, вызывающими некроз 172
2. Девитализация путем индукции апоптотической гибели клеток 178
Глава 9. Изучение кальцификации девитализированных аортальных клапанов 183
1. Кальцификация стенок и мышечной ткани аортальных клапанов сердца свиньи после обработки агентами, вызывающими некроз и апоптоз 183
1.1. Кальцификация стенок и мышечной ткани аортальных клапанов сердца свиньи после обработки агентами, вызывающими некроз 183
1.2.Изучение кальциноза стенок аорты свиньи, обработанных различными апоптотическими агентами 187
2. Изучение механизма снижения кальциноза стенок аорты после обработки ЭДТА 189
2.1. Снижение кальциноза мышечной ткани путем инкубации с ЭДТА или с дигитонином. 191
3. Обсуждение 192
Глава 10. Результаты заселения девитализированных аллографтов клетками реципиента 194
1. Получение культуры гладкомышечных клеток из аорты крысы линии Wistar 194
2. Адгезия гладкомышечных клеток к базальной мембране аорты и миграция в медию аорты 196
3. Адгезия и миграция клеток в створки и стенки девитализированных аллографтов клапанов сердца 196
4. Получение культуры миофибробластов из варикозных вен человека 200
5. Получение культуры эмбриональных фибробластов человека 201
6. Разработка роллерной установки для равномерного посева клеток на ткань аллографтов 202
7. Адгезия миофибробластов и эмбриональных фибробластов к стенкам сосудов и к створкам аллографтов в стационарных условиях 203
8. Адгезия миофибробластов и эмбриональных фибробластов к стенкам сосудов и к створкам аллографтов в условиях вращения кондуита в роллере 205
9. Изучение способности модифицированных и немодифицированных тканей клапанов сердца к кальцификации на модели подкожной имплантации крысам. Морфологические особенности тканей после 2 месяцев подкожной имплантации 206
Заключение 209
Выводы 213
Практические рекомендации 214
Список литературы 215
