Введение
Глава I. Биологические особенности криптоспоридий 15
1.1 Биология криптоспоридий, история открытия и таксономия паразита 15
1.2 Характеристика основных видов криптоспоридий, патогенных для человека 27
1.3 Экспериментальный криптоспоридиоз у Мышей SCID 38
1.4 Культивирование криптоспоридий in vitro 42
Глава II. Эпидемиология, лабораторная диагностика и особенности клинических проявлений криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией 44
2.1 Эпидемиология криптоспоридиоза 44
2.2 Лабораторные методы диагностики криптоспоридиоза 67
2.3 Клинические проявления криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией 76
2.4 Лечение криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией 93
Глава III. Клиническая характеристика больных, объектов окружающей среды и методов исследования 101
3.1 Клиническая характеристика больных 101
3.2 Лабораторные методы диагностики криптоспоридиоза 112
3.2.1 Метод прямой микроскопии испражнений 112
3.2.1 Окраска ооцист криптоспоридий в мазке испражнений по методу Киньюн 110
3.2.3 Метод прямой иммунофлюоресценции 117
3.2.4 Метод иммуномагнитной сепарации 118
3.3. Методика выделения ДНК, постановки полимеразной цепной реакции (ПНР) и анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализ) 123
3.3.1 Метод экстракции ДНК 124
3.3.2 Методика полимеразной цепной реакции — ПНР 127
3.3.3 Методика анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов ДНК (ПДРФ-анализ) 128
3.4 Методы исследования ооцист криптоспоридии в питьевой воде Ростовской городской системы водоснабжения и в воде бассейна реки Дон и его притоков 131
3.4.1 Исследование ооцист криптоспоридии в питьевой воде 134
3.4.2. Исследование ооцист криптоспоридии в воде бассейна реки Дон и его притоков 138
3.5. Методы выделения, концентрации и очистки ооцист криптоспоридии из испражнений 149
3.5.1. Метод предварительной очистки ооцист из испражнений путем осаждения 149
3.5.2. Метод очистки и концентрации ооцист из испражнений путем центрифугирования в градиенте плотности раствора сахарозы и в градиенте плотности раствора хлорида цезия 150
3.6 Оценка жизнеспособности ооцист криптоспоридии по показателю их эксцистирования (освобождения спорозоитов) 157
3.7 Оценка вирулентности ооцист криптоспоридии, выделенных из испражнений больных ВИЧ-инфекцией, на модели экспериментальной инфекции у мышей линии SCID 159
3.8 Методика культивирования криптоспоридии in vitro в среде, не содержащей клеток хозяина 163 .
3.9 Характеристика обследованных сельскохозяйственных животных и птиц, хищников Ростовского зоопарка и дико живущих лис 171
Глава IV. Результаты исследования 174
4.1 Результаты сравнительной оценки чувствительности различных лабораторных методов диагностики криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией 174
4.2 Клинические проявления и прогностическое значение криптоспоридиоза у больных на разных стадиях ВИЧ-инфекции 187
4.2.1 Клиническая характеристика криптоспоридиоза у больных ВИЧ-инфекцией на момент установления диагноза 187
4.2.2 Результаты наблюдения за больными ВИЧ-инфекцией с криптоспоридиозом в отдаленном периоде 196
4.3 Результаты исследования биологических свойств криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией 202
4.3.1 Молекулярно-генетическая характеристика криптоспоридий, обнаруженных у больных ВИЧ-инфекцией 202
4.3.2 Оценка жизнеспособности ооцист криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ инфекцией, по показателю их эксцистирования 205
4.3.3 Оценка вирулентности ооцист криптоспоридий, выделенных от больных ВИЧ-инфекцией, при экспериментальном заражении мышей SCID 208
4.3.4 Оценка биологических свойств криптоспоридий по росту в культуре (в питательной среде, не содержащей клеток хозяина) 211
4.4 Результаты исследования роли водного фактора передачи криптоспоридиоза и резервуара паразита среди животных 218
4.4.1 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в питьевой воде 218
4.4.2 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в воде бассейна реки Дон и его притоков 220
4.4.3 Результаты исследования ооцист криптоспоридий в испражнениях сельскохозяйственных животных, хищников зоопарка и дико живущих лис 230
Глава V. Обсуждение результатов 235
Выводы 262
Практические рекомендации 263
Список литературы 265
