Введение
ГЛАВА 1. Литературный обзор
1.1 Классический метод кристаллизации мембранных белков 12
1.2 Кристаллизация in meso и фазовая диаграмма моноолеина 17
1.3 Гипотетический молекулярный механизм кристаллизации мембранных белков в кубической фазе 19
1.4 Теоретическое представление о кристаллизации in meso 21
1.5 Классификация и свойства детергентов 23
1.6 Влияние детергентов на липидную мембрану 28
1.7 Влияние детергентов на фазовое поведение системы моноолеин/вода 30
1.8 Структура и кристаллы, выращенные при кристаллизации in meso 32
1.9 Із-фаза 35
1.10 Кристаллизация из бицелл 35
1.11 Кристаллизация из везикул 37
1.12 Бактериородопсин 38
1.13 Двойникование кристаллов 41
1.14 Заключение 42
ГЛАВА 2. Материалы и методы
2.1 Выделение и очистка бактериородопснна 45
2.1.1 Материалы для культивирования бактерий и выделения бактериородопснна 45
2.1.2 Культивирование бактерий 45
2.1.3 Выделение пурпурных мембран 46
2.1.4 Выделение и солюбилизация бактериородопснна 46
2.1.5 Определение концентрации и качества бактериородопснна 47
2.1.6 Электрофоретическое разделение белков 47
2.1.7 Определение концентрации детергента 48
2.1.8 Дополнительная очистка солюбилизированного бактериородопсина. Метод повышения качества БР 48
2.2 Кристаллизация бактериородопсина
2.2.1 Материалы для кристаллизации
2.2.2 Кристаллизация в мостиках методом диффузии паров воды 49
2.2.3 Кристаллизация бактериородопсина из пурпурных мембран в мезофазе моноолеина 49
2.2.4 Отбор и подготовка кристаллов для кристаллографических экспериментов 50
2.3 Кристаллографические измерения и обработка рентгеновских данных 50
2.3.1 Тестовые измерения и определение фактора двойникования кристаллов . 50
2.3.2 Установка для рентгеновской кристаллографии белков 51
2.3.3 Выбор стратегии измерений 51
2.3.4 Обработка рентгеновских данных 52
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение. исследование механизма кристаллизации мембранных белков методом inmeso
3.1 Дополнительная очистка солюбилизированного белка 56
3.2 Кристаллизация БР из пурпурных мембран, минуя стадию солюбилизации 59
3.3 Поведение кристаллизационной системы при изменении объемного соотношения белковый раствор / липид 65
3.4 Поведение кристаллизационной системы при добавлении различного рода добавок 70
Сравнительный анализ кристаллизации бактериородопсина с 3.5 использованием п-октил-Р-В-глюкопиранозида и п-октил-p-D-тиоглюкопиранозида 72
3.6 Исследование кристаллизации БР с добавлением детергентов из семейства глюкопиранозидов с различными гидрофобными хвостами 75
3.7 Исследование кристаллизации БР с добавлением детергентов из других семейств с различными гидрофобными хвостами
ГЛАВА 4. Результаты и обсуждение. Бактерпородопсин
Основные выводы работы
Благодарности
Библиографический список используемой литературы .
