Введение
Глава 1. Латеральный проточный иммуноанализ 8
1.1. Строение иммунохроматографической тест-полоски 10
1.2. Теоретические основы латерального проточного иммуноанализа 13
1.3. Основные компоненты иммунохроматографических тест-систем 17
1.3.1. Аналитическая мембрана 17
1.3.1.1. Полимерный состав и свойства мембран 17
1.3.1.2. Факторы, влияющие на сорбцию белков на мембране 20
1.3.2. Мембрана для нанесения образца 22
1.3.3.Мембрана для нанесения конъюгата 23
1.3.4.Абсорбирующая (впитывающая) мембрана 23
1.3.5.Антитела в иммунохроматографическом анализе 24
1.3.6. Метки, используемые в иммунохроматографическом анализе 25
1.3.6.1. Латексные частицы 26
1.3.6.2. Флуоресцентные метки 26
1.3.6.3. Квантовые точки 27
1.3.6.4. Парамагнитные частицы 28
1.3.6.5. Коллоидное золото 29
1.3.6.6. Нанооболочки 32
Глава 2. Биохимические маркеры для диагностики острого инфаркта миокарда 35
2.1. Белок, связывающий жирные кислоты (с-БСЖК) 36
2.1.1. Структура и функции с-БСЖК 36
2.1.2. Методы определения с-БСЖК 40
2.2. Тропонин 43
2.2.1. Структура и функции тропонина 43
2.2. 2. Методы определения тропонинов 46
III. Экспериментальная часть 50
Глава 3. Материалы и методы 50
3.1. Материалы и оборудование 50
3.2. Методы исследования 52
3.2.1. Получение наночастиц коллоидного золота по методу Френса 52
3.2.2. Получение золотых нанооболочек на сферах из диоксида кремния 52
3.2.3. Определение оптимальных условий сорбции антител на наночастицах золота53
3.2.4. Получение конъюгата частиц золота с антителами 54
3.2.5. Получение конъюгата наносфер с антителами 54
3.2.6. Составление иммунохроматографической тест-полоски 54
3.2.7. Проведение иммунохроматографического анализа 55
3.2.8. Определение чувствительности и специфичности тест-системы 55
IV. Результаты и обсуждение 57
Глава 4. Получение наночастиц золота и конъюгатов антител на их основе 57
4.1. Получение и характеристика наночастиц золота 57
4.2. Получение конъюгатов антител, специфичных к с-БСЖК, с наночастицами золота .60
Глава 5. Разработка иммунохроматографической тест-системы для определения С-БСЖК 64
5.1. Оптимизация условий проведения иммунохроматографического анализа с использованием в качестве метки наночастиц золота для определения с-БСЖК 64
5.1.1. Выбор пары антител 64
5.1.2. Влияние размеров наночастиц золота на аналитические характеристики тест системы 66
5.1.3. Выбор аналитической мембраны 67
5.1.4. Оптимизация концентраций специфических реагентов 69
5.1.5. Выбор мембран для нанесения образца 71
5.2. Иммунохроматографический анализ с-БСЖК с использованием золотых нанооболочек в качестве метки 75
5.2.1 .Получение и характеристика золотых нанооболочек 75
5.2.2. Использование нанооболочек в качестве метки в иммунохроматографическом
анализе 81
5.3. Определение с-БСЖК в сыворотке и цельной крови человека 83
5.4. Стабильность тест-системы с-БСЖК 86
Глава 6. Разработка иммунохроматографической тест-системы для определения тропонина 88
6.1. Получение конъюгатов антител, специфичных к тропонину I, с наночастицами золота 88
6.2. Оптимизация условий проведения иммунохроматографического анализа с использованием наночастиц золота для определения тропонина 1 91
6.2.1. Выбор пары антител 91
6.2.2. Выбор мембран 92
6.2.3. Влияние размеров наночастиц золота на аналитические характеристики тест системы 94
6.3. Определение тропонина І в сыворотке и цельной крови 95
6.4. Стабильность тест-системы тропонина 1 98
Глава 7. Определение с-бсжк и тропонина i и в образцах сыворотки крови 101
Глава 8. разработка иммунохроматографическои тест-системы для одновременного определение с-бсжк и тропонина 1 105
VI. Список литературы 1
