Введение
1. Обзор литературы 7
1.1. Киназы глицерофосфолипидов 7
1.1.1. Фосфатидилинозитол 3 -киназы 7
1.1.2. Фосфатидилинозитол 4-киназы 11
1.1.3. Фосфатидилинозитол-4-фосфат5-киназы 12
1.2. Киназы сфинголипидов 13
1.3. Каталитически активные антитела 14
1.3.1. Моноклональные абзимы с синтетическими свойствами 17
1.3.2. Механизмы генерации каталитически активных антител 25
1.3.3. Природные абзимы при аутоиммунных заболеваниях 26
1.3.4. Природные абзимы молока человека 28
1.3.4.1. Абзимы с протеинкиназнои активностью 29
1.3.4.2. Иммуноглобулины класса А с липидкиназной активностью 30
1.3.4.3. Абзимы с другими типами активностей 31
1.4. Защитные факторы молока человека 33
1.4.1. Иммуноглобулины 33
1.4.2. Липиды 35
1.4.3. Олиго-и полисахариды 38
2. Материалы и методы 41
2.1. Реактивы и материалы 41
2.2. Методы 42
2.2.1. Выделение иммуноглобулинов из молока человека 42
2.2.2. "Кислый шок" препаратов антител 42
2.2.3. Концентрирование препаратов антител 43
2.2.4. Определение концентрации белка 43
2.2.5. Электрофоретический анализ белка 43
2.2.6. Определение липидкиназной активности препаратов антител 44
2.2.7. Опредение полисахаридкиназнои активности препаратов антител 44
2.2.8. Анализ стабильности комплекса олигосахаридов с антителами 45
2.2.9. Гидролиз 32Р-меченных олиго- и полисахаридов 45
2.2.10. Определение протеинкиназнои активности препаратов антител 46
2.2.11. Гидрофобная хроматография антител на фенил-сефарозе SL-B6 46
2.2.12. Исследование взаимодействия антител с аффинными сорбентами 46
2.2.13. Аффинная хроматография иммуноглобулинов на сорбентах с иммобилизованными анти Ig-антителами 47
2.2.14. Аффинная хроматография иммуноглобулинов на сорбентах с иммобилизованными антителами против легких цепей 47
2.2.15. Тестирование липидкиназной активности антител in situ 47
2.2.16. Тестирование полисахаридкиназной активности антител in situ 48
2.2.17. Получение и очистка Fab-фрагментов иммуноглобулинов класса А 49
2.2.18. Получение и очистка Fab-фрагментов имуноглобулинов класса G 49
2.2.19. Определение кинетических параметров реакции фосфорилирования 50
2.2.20. Аффинная хроматография препаратов антител на АТР-сефарозе 50
3. Результаты и их обсуждение 51
3.1. Выделение иммуноглобулинов из молока 51
3.2. Исследование антител с липидкиназной активностью 56
3.2.1. Стабильность комплексов антитела - липиды 61
3.2.2. Анализ структуры эндогенных липидов 62
3.3. Исследование антител с полисахаридкиназной активностью 64
3.3.1. Стабильность комплексов антитела - сахариды 66
3.3.2. Анализ структуры эндогенных олиго- и полисахаридов 70
3.4. Доказательства принадлежности каталитической активности антителам 77
3.4.1. «Кислый шок» препаратов антител 78
3.4.2. Взаимодействие антител с аффинными сорбентами 79
3.4.3. Тестирование препаратов антител in situ 83
3.5. Субстратная специфичность антител 85
3.5.1. Липидкиназная активность антител 85
3.5.2. Олигосахаридкиназная активность антител 90
3.6. Локализация активных центров антител 92
3.6.1. Каталитическая активность Fab-фрагментов иммуноглобулинов 92
3.7. Кинетические параметры реакции фосфорилирования липидов 95
3.8. Кинетические параметры реакции фосфорилирования олигосахаридов 100
3.9. Возможная биологическая роль абзимов с киназными активностями 104
1. Выводы 105
2. Список литературы 106
