Введение
1 Обзор литературы 10
1.1 Азотфиксирующие ризобактерии рода Azospirillum 10
1.1.1 Физиолого-морфологические особенности азоспирилл 12
1.1.2 Практическая значимость использования бактерий рода Azospirillum 14
1.1.3 Характеристика этапов, ассоциативного взаимодействия 16
1.2 Структура и функции липополисахаридов грамотрицательных бактерий 22
1.2.1 Строение клеточной оболочки бактерий 22
1.2.2 Структурные особенности липополисахаридов 24
1.2.3 Роль липополисахаридов в реализации растительно-микробных взаимодействий 29
1.3 Методы исследования липополисахаридов 31
1.3.1 Выделение и очистка липополисахаридов 31
1.3.2 Разделение липидного и углеводного компонентов липополиса-харида .33
1.3.3 Изучение строения О-специфических полисахаридов 35
1.3.3.1 Химические методы исследования 35
1.3.3.2 Структурный анализ полисахаридов методом ЯМР -спектроскопии 37
1.4 Липополисахариды и О-спецйфические полисахариды азоспирилл 40
2 Материалы и методы 42
2.1 Микробиологические культуры и условия их выращивания 42
2.2 Характеристика растительного объекта 43
2.3 Приборы и материалы 44
2.4 Методы исследования : 46
2.4.1 Исследование адсорбции бактерий на корнях растений 46
2.4.2 Хроматографические методы 46
2.4.2.1 Гель-фильтрация 47
2.4.2.2 Ионообменная хроматография 48
2.4.2.3 Распределительная хроматография на бумаге 48
2.4.2.4 Газо-жидкостная хроматография 49
2.4.3 Колориметрическое определение 50
2.4.4 ЯМР - спектроскопия 50
2.4.5 Встречная двойная иммунодиффузия 51
2.4.6 Электрофорез в полиакриламидном геле 52
2.4.7 Дот-анализ ЛПС и О-ПС с использованием АЗП, меченого коллоидным золотом 52
2.4.8 Исследование изменений морфологии корневых волосков 52
2.5 Экстракция и анализ липополисахаридов Azospirillum brasilense 53
2.6 Выделение и характеристика О-ПС азоспирилл 55
2.6.1 Получение О-ПС кислотным гидролизом ЛПС 55
2.6.2 Получение полисахаридов с поверхности бактериальных клеток 55
2.6.3 Распад по Смиту 56
2.6.4 Анализ полисахарида методом метилирования 56
3 Результаты исследований и их обсуждение 57
3.1 Исследование адсорбционной способности Azospirillum brasilense Sp245 57
и КМ252
3.1.1 Изучение гидрофобности бактериальной поверхности 61
3.2 Сравнительная характеристика ЛПС Azospirillum brasilense 63
3.2.1 Выделение и очистка ЛПС 63
3.2.2 Хроматографический и электрофоретический анализ ЛПС 63
3.2.3 Изменения химического состава ЛПС у омегон-Km мутантов Azospirillum brasilense 71
3.3 Изучение сродства ЛПС Azospirillum brasilense к лектину пшеницы 74
3.4 Влияние ЛПС Azospirillum brasilense Sp245 и его омегон-Km мутантов на морфологию корневых волосков проростков пшеницы 80
3.5 Определение первичной структуры повторяющегося звена О-ПС A. brasilense Sp245, КМ018 и КМ252 83
3.6 Определение структуры повторяющегося звена О-ПС A. irakense КВС1 96
Заключение 102
Выводы 106
Список использованной литературы
