Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1. Структурная и функциональная характеристика грелина 16
1.2. Роль грелина в регуляции репродуктивной системы 26
1.3. Роль грелина в регуляции клеток иммунной системы 27
1.4.Характеристика основных типов дендритных клеток и регуляторных лимфоцитов 30
1.5.Механизмы, определяющие формирование иммунной толерантности при беременности .38
Глава 2. Материалы и методы 41
2.1. Методология и методы исследования .41
2.2. Объекты исследования .45
2.3. Биологически активные вещества 45
2.4. Получение мононуклеарных клеток периферической крови 45
2.5. Получение клеток тимуса 46
2.6. Генерация дендритных клеток из моноцитов периферической крови .46
2.7. Выделение дендритных клеток из тимуса 47
2.8. Иммуномагнитная сепарация Т- и В-лимфоцитов 48
2.9. Изучение роли грелина в регуляции формирования миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса 49
2.10. Оценка роли грелина в регуляции формирования дендритных клеток, генерируемых из моноцитов периферической крови 50
2.11. Определение роли грелина в индукции регуляторных подтипов В лимфоцитов из CD19+CD25+-клеток 50
2.12. Изучение роли грелина в регуляции экспрессии иммуносупрессорных молекул на CD4+CD25+ Т-лимфоцитах .52
2.13. Экспериментальная модель для оценки роли миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток в регуляции дифференцировки тимоцитов .53
2.14. Определение роли дендритных клеток в индукции Treg и Th17 из аллогенных лимфоцитов 54
2.15. Экспериментальные подходы для изучения роли дендритных клеток в регуляции толерогенного потенциала CD19+CD25+ В-лимфоцитов 55
2.16. Экспериментальная модель для определения роли CD19+CD25+ В лимфоцитов в индукции формирования Treg и Th17 56
2.17. Определение фенотипа и отдельных поверхностных маркеров клеток периферической крови и тимуса 56
2.18. Оценка продукции цитокинов в супернатантах клеточных культур 63
2.19. Статистический анализ 64
Глава 3. Результаты собственных исследований 65
3.1. Влияние грелина на процессы индукции регуляторных Т- и В-лимфоцитов периферической крови .65
3.1.1. Роль грелина в регуляции функциональной активности CD4+CD25+-клеток 66
3.1.2. Влияние грелина на индукцию толерогенного фенотипа CD19+CD25+-клеток 69
3.1.3. Роль грелина в регуляции количества Treg и Th17 в присутствии CD19+CD25+-клеток 72
3.2. Значение грелина в регуляции созревания дендритных клеток периферической крови и их функциональной активности 74
3.2.1. Влияние грелина на созревание дендритных клеток, генерируемых из моноцитов и продукцию цитокинов 75
3.2.2 Роль прединкубированных с грелином дендритных клеток в регуляции баланса Treg/ Th17 и продукции цитокинов 80
3.2.3. Роль прединкубированных с грелином дендритных клеток в индукции толерогенного потенциала CD19+CD25+ В-лимфоцитов 83
3.3. Влияние грелина на формирование субпопуляций дендритных клеток и Т-лимфоцитов тимуса и их функциональной активности 86
3.3.1. Значение грелина в регуляции фенотипа миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса 87
3.3.2. Роль прединкубированных с грелином миелоидных и плазмоцитоидных дендритных клеток тимуса в индукции формирования Treg, Th17 и NKT-клеток 89
Заключение 93
Выводы .101
Практические рекомендации .103
Список сокращений и используемых обозначений .104
Список литературы .108
