Введение
Глава 1. Обзор данных литературы 17
1.1. Поражения мозга при ишемии 17
1.1.1. Ишемический инсульт 17
1.1.2. Моделирование ишемии 20
1.2. Возбуждающий нейромедиатор глутамат 22
1.2.1. Глутамат в норме 22
1.2.2. Рецепторы глутамата 23
1.2.3. Повышение уровня глутамата при ишемии 27
1.2.4. Glu-индуцированные повреждения клеток 30
1.3. Нарушения ионного гомеостаза при воздействии Glu 31
1.3.1. Изменения [Ca2+]i, развитие ОКД 31
1.3.2. Кальциевый гомеостаз 37
1.3.3. Изменения внутриклеточной концентрации Na+ 40
1.4. Энергетический обмен в мозге 45
1.4.1. Энергетический обмен в здоровом мозге 45
1.4.2. Нарушения энергетического обмена при ишемии 49
1.4.3. Дыхательная цепь митохондрий и NADH 50
1.4.4. Изменения внутриклеточной концентрации АТФ 55
1.4.5. Роль митохондриальной поры в механизмах развития ОКД 56
1.5. МТТ-тесты и активность дегидрогеназ 57
Глава 2. Материалы и методы исследования 60
2.1. Приготовление первичных культур зернистых нейронов мозга крысы 60
2.2. Трансфекция нейрональных культур 61
2.3. Микрофлуориметрические исследования 62
2.4. Обработка результатов 69
Глава 3. Результаты и обсуждение 71
3.1. Сенситизация нейронов к повторному действию Glu 71
3.1.1. Сравнение изменений [Ca2+]i и m при двукратном действии Glu 71
3.1.2. Сенситизация при пониженной концентрации внеклеточного Ca2+ ([Ca2+]o) 79
3.1.3. Сравнение динамики [Ca2+]i и m при повторных воздействиях Glu 82
3.2. Динамика изменений [Ca2+]i и m при повторном действии Glu в условиях «стронциевой» блокады PTP 84
3.3. Роль повышения протонной проводимости внутренней мембраны митохондрий в сенситизации 87
3.4. Динамика [NADH] во время и после Glu воздействия 90
3.5. Динамика изменений [АТФ]с и pHc во время и после воздействия Glu в индивидуальных нейронах 92
3.6. Исследование гомеостаза Na+ 100
3.6.1. Изменения [Na+]i во время глутаматного воздействия и после него 100
3.6.2. Ответы нейронов на замену Na+ на непроникающий катион N-метил-D-глюкозамин 104
3.7. Исследование активности дегидрогеназ нейронов с помощью восстановления МТТ до формазана 109
3.7.1. Сопоставление сигналов потенциал-зависимого флуоресцентного зонда и светопропускания в первичной культуре нейронов мозжечка 110
3.7.2. Влияние МТТ на флуоресценцию MTG и NADH-зависимую автофлуоресценцию нейронов 115
Заключение 125
Выводы 132
Благодарности 133
Список использованной литературы 133
