ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………
7
ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ………………...……………...……… 15
1.1 Развитие механизмов врожденного иммунитета….………….……... 15
1.1.1 Nod -подобные рецепторы …………………………………….…… 16
1.1.2 Toll -подобные рецепторы …………..…………………………..… 20
1.1.3 RIG-I-подобные рецепторы …………………………………….…. 25
1.1.4 Рецепторы лектина С-типа …………………………………….….. 27
1.1.5 Клеточные факторы врожденного иммунитета ………….……….. 30
1.1.6 Белки эпителия…………………………………………………..….. 31
1.1.7 Антимикробные пептиды …………………………………….…….. 32
1.1.7.1. Антимикробная активность антимикробных пептидов…….….. 38
1.1.7.2 Иммуномодулирующая активность антимикробных пептидов 42
1.1.7.3 Влияние антимикробных пептидов на гуморальный
иммунитет……………………………………………………………………
44
1.1.7.3.1 Адьювантная активность антимикробных пептидов …………... 44
1.1.7.3.2 Влияние антимикробных пептидов на продукцию цитокинов и
хемокинов ……………………………………………………….……….....
46
1.1.7.3.3 Действие антимикробных пептидов на систему комплемента 48
1.1.7.4 Влияние антимикробных пептидов на иммунокомпетентные
клетки ………………………………………………………………….…….
49
1.1.7.5 Аллергенные свойства антимикробных пептидов .…………..….. 57
1.2 Биорегуляторы бактериального происхождения…………....…..….… 64
1.3 Клиническая эффективность биорегуляторов бактериального
происхождения ………………………………………………….….……….
70
1.3.1 Лекарственные средства на основе мурамилпептидов …………..... 70
1.3.1.1 Источники мурамилпептидов в организме человека…….…..…... 70
1.3.1.2 Влияние мурамилпептидов на микроорганизмы ………….…..… 72
1.3.1.3 Структура мурамилпептидов и лекарственные средства на их
3
основе…………………………………………………………………………
75
1.3.1.4 Моносахаридсодержащие мурамилпептиды ……………….…….
78
1.3.1.5 Дисахаридсодержащие мурамилпептиды …………………………
84
1.3.2 Лекарственные средства на основе липополисахаридов……………
98
1.4 Биорегуляторы бактериального происхождения на основе антимикробных пептидов …………………………………………….…….
101
1.4.1 Источники, организация генов и биосинтез бактериоцинов .……...
103
1.4.2 Механизм действия на микроорганизмы ……………..…………..…
105
1.4.3 Биодоступность и безопасность бактериоцинов ……………….…..
108
1.4.4 Иммуномодулирующая активность бактериоцинов ………….……
112
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ………………
124
2.1 Дизайн исследования с использованием лабораторных животных
126
2.1.1Экспериментальная модель аллергического воспаления …………...
126
2.1.1.1 Получение бронхоальвеолярного лаважа………………….…….…
128
2.1.1.2 Получение сыворотки крови в модели астмы ………….………….
128
2.1.1.3 Получение образцов легких ……………………………….….…….
128
2.1.1.4 Количественный и качественный анализ клеток в бронхоальвеолярном лаваже……………………………….. …….……..….
128
2.1.1.5 Анализ содержания иммуноглобулинов …………….. ……………
128
2.1.1.6 Гистологические исследования легких животных……….……..…
129
2.1.1.7 Выделение крови животных для ПЦР анализа ………………..…..
129
2.1.2 Исследование влияния биорегуляторов бактериального происхождения на экспрессию генов TNF-α, рецепторов TLR4 и NOD2, регуляторных факторов A20 и ATF3………………………………..….….
129
2.1.2.1 Выделение РНК и реакция обратной транскрипции ……….…….
130
2.1.2.2 Исследование экспрессии генов……………………………………
130
2.2 Дизайн исследований с использованием биоматериалов человека
131
2.2.1 Выделение мононуклеарных клеток человека и подготовка их к культивированию …………………………………………………….……
133
4
2.2.2 Определение цитокинов в мононуклеарных клетках человека .....
133
2.2.3 Выделение NК-клеток из мононуклеарных клеток человека методом магнитной сепарации ……………………………………….…..
133
2.2.4 Оценка влияния глюкозаминилмурамилдипептид-кислоты на NК-клетки …………………………………………...……………………….….
134
2.2.5 Регистрация выделения оксида азота под действием мурамилпептидов и липополисахарида ……………………………...
136
2.2.6 Фенотипирование дендритных клеток человека ……………………
136
2.2.7 Исследование влияния адреналина и норадреналина на изменение фенотипа дендритных клеток ………………………………………………
137
2.2.8 Характеристика пациентов с псориазом ……………………………
137
2.2.9 Определение цитокиновых биомаркеров в сыворотке крови пациентов с псориазом ………………………………………………….…..
139
2.2.10 Характеристика пациентов, принимавших участие в исследовании ротовой жидкости……………………………………………
139
2.2.11 Лабораторные исследования ротовой жидкости …………………..
140
2.2.12 Выделение ДНК, РНК и реакция обратной транскрипции ………
141
2.2.13 Оценка эффективности глюкозаминилмурамилдипептида в профилактике острых респираторных инфекций в неблагоприятный эпидемиологический период………………………………………………..
141
2.3 Статистическая обработка результатов ………………………….…….
142
ГЛАВА 3 Исследование иммунотропных эффектов биорегуляторов бактериального происхождения в экспериментальной модели аллергического воспаления …………………………………………………
143
ГЛАВА 4 Исследование клинико-иммунологической эффективности глюкозаминилмурамилдипептида при вирусных и бактериальных инфекциях……………………………………………………………………
149
4.1 Оценка эффективности глюкозаминилмурамилдипептида в профилактике острых респираторных инфекций в неблагоприятный
5
эпидемиологический период …….……………………………………..…..
149
4.2 Исследование эффектов глюкозаминилмурамилдипептида на локальный иммунитет у пациентов с кариесом ………………………..….
151
4.3 Исследование модулирующих эффектов глюкозаминилмурамилдипептида в отношении микрофлоры слизистой полости рта в норме и при инфекционном процессе……………..……….
152
4.4 Клинико-иммунологическая эффективность глюкозаминилмурамилдипептида при псориазе …………………………
155
ГЛАВА 5 Исследование механизмов иммунотропных эффектов биорегуляторов бактериального происхождения …………………………
162
5.1 Влияние биорегуляторов бактериального происхождения на экспрессию генов регуляторных факторов на уровне сигнальных путей .
162
5.2 Влияние глюкозаминилмурамилдипептид-кислоты на внутриклеточные сигнальные пути NK-клеток in vitro …………………..
168
5.3 Роль мурамилпептидов и липополисахарида в регуляции экспрессии оксида азота ………………………………………………………………….
173
5. 4 Влияние биорегуляторов бактериального происхождения на продукцию хемокинов, факторов роста, провоспалительных и противовоспалительных цитокинов ……………………………………….
174
5.4.1 Влияние дисахаридсодержащих мурамилпептидов на продукцию цитокинов ……………………………………………………………………
174
5.4.2 Влияние липополисахарида, глюкозаминилмурамилдипептида и бактериоцина низина на продукцию хемокинов, факторов роста, провоспалительных и противовоспалительных цитокинов………………
177
5.5 Влияние липополисахарида, глюкозаминилмурамилдипептида, катехоламинов и низина на фенотипические изменения дендритных клеток человека в системе in vivo и ex vivo .……………………...........…
180
6
5.6 Влияние липополисахарида, глюкозаминилмурамилдипептида и катехоламинов на нейтрофильные гранулоциты человека .….…………
186
ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………..…
195
ВЫВОДЫ……………………………………………………………………
209
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ……………………………………
212
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ….……...
213
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………..
216
