Введение
Глава 1. Конструирование рекомбинантных клеток E. coli - биосенсеров для анализа генотоксичности химических соединений и физических факторов 10
1.1. Клонирование фрагмента ДНК, кодирующего оперон биолюминесценции
P. leiognathi 11
1.2. Биолюминесцентный анализ SOS-ответа клеток E. coli 14
1.3. Индукция SOS-ответа под действием веществ – мутагенов (SOS lux тест) 16
1.4. Индукция SOS-ответа под действием UV или -излучений 19
1.5. Анализ генотоксического действия комплексных соединений платины и сравнительная оценка их генотоксичности в эукариотической тест-системе 19
1.6. Возможности проведения SOS lux теста в полуавтоматическом варианте в микропланшетах или использования иммобилизованных клеток в тест системе 24
Заключение 25
Глава 2. Экспрессия синтетических генов в клетках E. coli 26
2.1. Цитоплазматическая экспрессия синтетических генов в клетках E. coli .27
2.1.1. Модификации штаммов-продуцентов интерлейкина-3 и интерлейкина-4 человека. 27
2.1.2. Делеционная форма интерлейкина-4 человека -IL4-2 31
2.1.3. Интерлейкин-10 человека – hIL-10 37
2.1.4. Нейротрофин глиального происхождения человека - GDNF 40
2.1.5. Фактор роста кератиноцитов человека - hKGF 44
2.1.6. Рецепторный антагонист интерлейкина-1 человека -hlL-1ra 46
2.1.7. -интерферон быка - bIFN- 47
2.2. Экстраклеточная продукция эпидермального фактора роста человека - hEGF 49
Заключение 52
Глава 3. Оптимизация ряда биосинтетических путей в клетках E. coli c целью повышения продукции аминокислот 53
3.1 Модификация путей транспорта источников углерода с целью увеличения продукции аминокислот E.coli штаммами-продуцентами 54
3.2. Модификация аллостерической регуляции ключевых ферментов пути биосинтеза аргинина 62
3.3. Идентификация генов, кодирующих ферменты пути I деградации путресцина (pathway: putrescine degradation I) 72 Заключение 85
Глава 4. Поиск новых низкомолекулярных биологически активных веществ растительного происхождения и возможность их микробиологического синтеза ... 86
4.1. Методы и тест-системы, использованные для скрининга этанольных экстрактов сухих растительных препаратов 87
4.2. Результаты скрининга этанольных экстрактов растительных препаратов 89
4.3. Идентификация новых соединений из экстрактов, активных в in vitro тестах 92
4.4. Заключение. Потенциальная возможность микробиологического синтеза идентифицированных соединений 99
Выводы 99
Список публикаций по теме диссертации
