Введение
ГЛАВА 1. Современные представления о механизмах нарушения иммунной и цитокиновой систем, основных молекулярно-биологических и гене тических маркерах, регулирующих апоптоз и пролиферацию, некоторых компонентах фибринолитической системы у больных с заболеваниями щитовидной железы (обзор литературы) 23
1.1. Механизмы иммунопатогенеза при опухолевом канцерогенезе у больных с онкологическими и аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы 24
1.2. Оценка уровней экспрессии тканевых маркеров апоптоза и пролиферации, сериновых протеаз и их ингибиторов в норме при солидных опухолях и аутоиммунных заболеваниях щитовидной железы 51
1.2.1. Оценка маркеров пролиферации и апоптоза при канцерогенезе у больных с онкологическими и аутоиммунными заболеваниями щитовидной железы 51
1.2.2. Роль сериновых протеаз в формировании неоангиогене-за, инвазии и метастазирования опухолей щитовидной железы 65
1.3. Молекулярно-биологические генные дефекты и мутации при опухолях и заболеваниях щитовидной железы 71
CLASS ГЛАВА 2. Общая характеристика материалов и методов исследовани CLASS я 75
2.1. Характеристика материала клинических исследований 75
2.2. Методы исследования 79
2.2.1. Получение и хранение тканей и плазмы крови 79
2.2.2. Метод проточной цитометрии 80
2.2.3. Оценка поверхностных рецепторов субпопуляций периферических лейкоцитов, маркеров апоптоза и пролиферации 81
2.2.4. Методы оценки цитокинов и соотношений (индексов) цитокинов в крови больных 83
2.2.5. Подготовка материала для исследования поверхностных рецепторов субпопуляций клеток крови и клеточной суспензии, полученной из тканей щитовидной железы 84
2.2.6. Методы оценки внутриклеточных маркеров апоптоза и пролиферации 85
2.3. Иммунохимические и молекулярно-биологические методы исследования в тканях (цитозолях, парафиновых блоках) щитовидной железы 86
2.3.1. Подготовка глубокозамороженной ткани щитовидной железы для исследования белков, регулирующих апоптоз и пролиферацию 86
2.3.2. Подготовка цитозолеи из тканей щитовидной железы для исследования компонентов системы активации плазминогена 87
2.3.3. Подготовка парафиновых блоков для проведения моле-кулярно-генетических исследований 87
2.4. Методы исследования тканей щитовидной железы 88
2.4.1. Определение маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию в свежезамороженных образцах 89
2.4.2. Определение содержания uPA, PAI-1 и tPA в цитозолях тканей щитовидной железы 93
2.4.3. Метод полимеразной цепной реакции для оценки мутаций онкогена р53 в парафиновых блоках 95
4 2.4.3.1. Подготовка материала для проведения полимеразной цепной реакции 96
2A3.2. Амплификация выделенного материала 97
2.4.3.3. Детекция продуктов амплификации 100
2.5. Оценка некоторых гормональных и иммунологических показателей у больных с заболеваниями щитовидной железы 101
2.6. Статистический анализ данных 102
ГЛАВА 3. Изменения некоторых параметров иммунной системы, мембранных белков апоптоза в крови больных с заболеваниями щитовидной железы (проточная цитометрия) 105
3.1. Оценка уровней клеточного и гуморального иммунитета у больных с аутоиммунными заболеваниями, злокачественными и доброкачественными опухолями щитовидной
железы 106
3.2. Оценка функциональных и аутоиммунных свойств у больных с аутоиммунной патологией, злокачественными и доброкачественными опухолями щитовидной железы 119
3.3. Сравнительная количественная оценка уровней некоторых цитокинов и их соотношений в плазме крови больных с аутоиммунными заболеваниями, доброкачественными и злокачественными опухолями щитовидной железы 123
3.4. Исследование FAS-L на основных субпопуляциях лимфоцитов и оценка диагностической эффективности этого белка у больных раком щитовидной железы 146
ГЛАВА 4. Оценка маркеров, регулирующих апоптоз, пролиферацию (проточная цитометрия), и уровня сериновых протеаз в нормальных и патологических тканях щитовидной железы 158
41 . Исследование молекулярно-биологических маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию, у больных с заболеваниями щитовидной железы (проточная цитометрия) 159
4.1.1. Сравнительное исследование маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию, их диагностическая эффективность в тканях щитовидной железы при аутоиммунных заболеваниях, доброкачественных и злокачественных опухолях 159
4.1.2. Исследование маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию, оценка их диагностической эффективности в тканях щитовидной железы при папиллярном и фолликулярном раке щитовидной железы 191
4.1.3. Сравнительное исследование общих и комбинированных маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию, их диагностическая эффективность в опухолях и «нормальных» тканях больных раком щитовидной железы 204
4.1.4. Исследование маркеров, регулирующих апоптоз и пролиферацию, оценка их диагностической эффективности в тканях у больных с разными вариантами аденомы щитовидной железы 215
4.1.5. Сравнительное исследование общих и комбинированных тканевых белков, регулирующих апоптоз и пролиферацию, их диагностическая эффективность в аденомах и «нормальных» тканях щитовидной железы 231
4.2. Сравнительный анализ содержания uPA, tPA и PAI-1 в злокачественных и доброкачественных новообразованиях щитовидной железы 240
ГЛАВА 5. Молекулярно-генетическии маркер р53 при заболеваниях щитовидной железы (по дан ным метода амплификации нуклеиновых кислот) 250
Заключение 254
Выводы 288
Практические рекомендации 291
Список литературы 294
