Введение
Обзор литературы 11
1. Характеристика дрожжей как модельного объекта эукариотической клетки .11
2. Дифференцировка дрожжей как следствие асимметрии деления .11
3. Асимметричность деления дрожжей Saccharomyces cerevisiae 12
4. Асимметричное наследование макромолекулярных комплексов клетками S. сerevisiae .13
5. Различие длин фаз клеточного цикла материнской и дочерней клетки S. cerevisiae 15
6. Различие профилей экспрессии материнской и дочерней клетки S. cerevisiae 17
7. Типы спаривания дрожжей и HO-эндонуклеаза .18
8. Механизм формирования асимметрии между материнской и дочерней клеткой дрожжей .20
9. Асимметричное деление и репликативная продолжительность жизни 22
10. Наследование белковых агрегатов клетками дрожжей S. cerevisiae .24
11. Репликативная продолжительность жизни дрожжей Saccharomyces cerevisiae .26
12. Методы определения репликативной продолжительности жизни дрожжей .27
13. Генетика репликативного старения дрожжей .30
14. Влияние АФК и митохондрий на репликативную продолжительность жизни дрожжей 32
15. Асимметричное наследование митохондрий клетками S. сerevisiae .34
16. Влияние вакуолярного рН на функцию митохондрий и репликативную продолжительность жизни дрожжей .36
17. Изменения в клетках дрожжей, происходящие на ранних этапах репликатвного старения .38
18. Дифференцировка дрожжей в составе микроколонии 39
19. Дифференцировка дрожжей в стационарной фазе роста .42
Материалы и методы исследования 44
1. Объект исследования и методы культивирования 44
2. Амплификация дрожжевых генов при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) .46
3. Горизонтальный гель-электрофорез ДНК .48
4. Выделение суммарной ДНК из дрожжей S. cerevisiae .49
5. Выделение плазмидной ДНК из E.coli методом щелочного лизиса .50
6. Обработка ДНК эндонуклеазами рестрикции .52
7. Выделение ДНК из агарозного геля .52
8. Реакция лигирования .52
9. Приготовление электрокомпетентных клеток E.coli и электропорация...53
10. Трансформация дрожжей 53
11. Получение мутантных линий дрожжей .54
12. Получение линии клеток, в которых ген URA3 находится под контролем HO промотора .55
13. Измерение устойчивости клеток S. cerevisiae K6001 к стрессу, вызванному низким рН, в зависимости от репликативного возраста 58
14. Измерение устойчивости клеток S. cerevisiae к стрессу в зависимости от репликативного возраста 59
15. Измерение доли клеток, образовавших споры на бедной среде, в зависимости от репликативного возраста .60
16. Измерение доли клеток, образовавших псевдогифу в ответ на бутанол, в зависимости от репликативного возраста .60
17. Прочие микроскопические методы 60
18. Статистическая обработка данных .61
Результаты и их обсуждение .62
1. Возрастное распределение культуры клеток дрожжей
2. Устойчивость клеток дрожжей к стрессу в зависимости от репликативного возраста 62
3. Зависимость стрессоустойчивости клеток дрожжей от размера .67
4. Стресс-специфический характер зависимости устойчивости клеток дрожжей в зависимости от репликативного возраста .70
5. Активация транскрипционных факторов ответа на стресс в зависимости от репликативного возраста 75
6. Характеристика ранневозрастных изменений клеточных органелл S. cerevisiae .77
7. Поиск генов, связанных с ранним снижением стрессоустойчивости клеток дрожжей 79
8. Способность к дифференцировке клеток дрожжей в зависимости от репликативного возраста 85
9. Получение и описание штамма, в котором оротидин 5 -фосфат декарбоксилаза находится под контролем НО промотора .88
Заключение 97
Выводы .100
Список использованной литературы
