Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 13
1.1. Гетерохроматин как феномен биологии эукариот 13
1.2. Малярийные комары рода Anopheles как объект эволюционных исследований
1.3. Гетерохроматин политенных хромосом 17
1.4. Гетерохроматин политенных хромосом малярийных комаров комплекса Anopheles maculipennis
1.5. Молекулярный состав гетерохроматина 23
1.5.1. Белки 23
1.5.2. Первичные последовательности ДНК гетерохроматина 27
1.5.3. Композиция последовательностей ДНК в гетерохроматине 36
1.6. Гетерохроматин и пространственная организация интерфазного ядра 38
ГЛАВА 2. Материалы и методы 48
2.1. Получение биологического материала 48
2.2. Приготовление препаратов политенных хромосом 48
2.3. Микродиссекция и ПЦР с частично вырожденным праймером 49
2.4. Клонирование амплифицированных фрагментов ДНК 50
2.5. In situ гибридизация 51
51
53
2.5.1. Флуоресцентная in situ гибридизация с политенными хромосомами трофоцитов комаров
2.5.2. In situ гибридизация клона А,20р1.4 на хромосомы слюнных желёз дрозофил
58
2.6. Выделение геномных ДНК 55
2.7. Саузерн-блот-гибридизация с мечеными геномными ДНК 55
2.8. Саузерн-блот-гибридизация клона Atr2R-73 56
2.9. Секвенирование и анализ последовательностей ДНК in silico 56
ГЛАВА 3. Результаты 58
3.1. Клонирование и получение районоспецифичной пробы ДНК прицентромерного гетерохроматина правого плеча хромосомы atroparvus методом микродиссекции
3.2. Анализ состава ДНК диффузного прицентромерного гетерохроматина правого плеча хромосомы 2 A. atroparvus
3.2.1. Анализ фрагментов на наличие гомологии друг с другом 60
3.2.2. Анализ фрагментов библиотеки Atr2R на наличие внутренних тандемных повторов
3.2.3. Поиск гомологичных последовательностей в различных базах данных
3.2.4. Анализ библиотеки Atr2R на содержание ДНК,
взаимодействующих с различными белковыми структурами ядра с помощью программы "ChrClass"
3.3. Анализ состава районов гетерохроматина в комплексе Anopheles maculipennis с помощью in situ гибридизации районооспецифичной 66 пробы прицентромерного гетерохроматина правого плеча хромосомы A. atroparvus
3.3.1. In situ гибридизация районооспецифичной пробы с политенными хромосомами трофоцитов яичников A. atroparvus
3.3.2. In situ гибридизация районоспецифичной пробы с политенными хромосомами трофоцитов яичников A. messeae
3.3.3. In situ гибридизация районоспецифичной пробы с политенными хромосомами трофоцитов яичников A. beklemishevi
3.4. Характеристика повторяющихся последовательностей ДНК прицентромерного гетерохроматина комаров комплекса Anopheles maculipennis
3.4.1. Выявление консервативных повторов с помощью Саузерн-блот-гибридизации и характеристика их первичных последовательностей
3.4.2. Хромосомная локализация консервативных повторяющихся последовательностей ДНК у A. atroparvus и A. messeae
3.4.3. Организация повторяющейся ДНК, гомологичной фрагменту Atr2R-73, в геномах комаров комплекса Anopheles maculipennis
3.5. Хромосомная локализация клона А,20р1.4 у видов дрозофил подгруппы melanogaster
ГЛАВА 4. Обсуждение 89
4.1. Применимость метода микродиссекции для клонирования гетерохроматина
4.2. Анализ гомологии последовательностей библиотеки Atr2R с базами данных
4.3. Сравнительный анализ общего состава районов гетерохроматина у комаров комплекса Anopheles maculipennis
4.4. Характеристика повторяющихся последовательностей прицентромерного гетерохроматина комаров комплекса Anopheles 95 maculipennis
4.4.1. Разнообразие повторяющихся последовательностей прицентромерного гетерохроматина
4.4.2. Консервативность повторяющихся последовательностей в комплексе Anopheles maculipennis
4.4.3. Преобразования хромосомной локализации повторяющихся последовательностей ДНК в комплексе Anopheles maculipennis 99
4.5. Молекулярные механизмы прекреплений хромосом к ядерной оболочке
Заключение 102
Выводы 104
Список использованной литературы
