Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы
1.1. Роль цитокинов в регуляции межклеточного гомеостаза 10
1.1.1. Классификация цитокинов иммунной системы: структурно-молекулярная, биофункциональная, рецепторная 12
1.2. Молекулярно-генетические аспекты гуморального и клеточного иммунного ответа 15
1.2.1. Исследование роли генов, кодирующих цитокины противовоспалительного ряда (IL-1, IL6, aNF) 18
1.2.2. Исследование роли генов, кодирующих цитокины противовоспалительного ряда (IL4, IL10) 26
1.3. Определение содержания цитокинов в биологических жидкостях человека как метод оценки иммунного статуса 28
1.4. Молекулярно-генетические и биохимические аспекты изучения системы биотрансформации ксенобиотиков 30
1.4.1. Гены подсемейства СУР1А1 35
1.4.2. Гены подсемейства СУР2Е1 37
1.4.3. Гены микросомальной эпоксидгидролазы-1 39
1.4.4. КАВ(Р)Н-хиноноксидоредуктаза-1 39
1.5. Основные положения генетического механизма иммунного ответа на ксенобиотики 42
1.6. Влияние иммунокорегирующих препаратов на показатели иммунного статуса 43
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
2.1.Объект исследования 46
2.2. Материалы исследования 46
2.3. Методы исследования
2.3.1. Генетические методы 49
2.3.1.1. Семейный анализ 50
2.3.2. Молекулярные методы
2.3.2.1. Выделение геномной ДНК методом фенольно-хлорофомной экстракции 51
2.3.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК 51
2.3.2.3. Электрофорез в полиакриламидном геле 51
2.3.2.4. ПДРФ-анализ 56
2.3.3. Определение продукции цитокинов клетками цельной крови ех vivo и на фоне приема иммуномодулятора in vivo 57
2.3.4. Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови иммуноферментным методом 2.3.4.1. Определение содержания IL-1(3, IL6, IL10 и aNF 58
2.3.4.2 Определение содержания IL1RA 60
2.3.4.3 Определение содержания IL2, IL4 61
2.3.5. Методы лабораторных исследований 62
2.3.5.1. Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ). Метод Панченкова 63
2.5. Методы статистического анализа результатов исследования 64
ГЛАВА 3. Результаты и обсуждение
3.1. Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови иммуноферментным методом 66
3.1.1. Корреляционные взаимосвязи между показателями цитокинов у здоровых индивидов и онкологических больных 71
3.1.2. Анализ корреляционной взаимосвязи между продукцией цитокинов и аллельным состоянием полиморфных маркеров генов цитокинового каскада у здоровых индивидов 73
3.2. Анализ наследование аллелей генов, регулирующих цитокиновый каскад. Семейный анализ 76
3.3. Анализ сочетаний генотипов генов семейства IL-1 и их влияния на концентрацию цитокинов в сыворотке крови 84
3.4. Анализ продукции цитокинов у практически здоровых людей в сыворотке крови на фоне стимуляции клеток крови митогеном и после приема иммуномодулятора 86
3.5. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов цитокиновой системы у здоровых индивидов и в группе с онкопатологией 89
3.6. Исследование роли межгенных взаимодействий 93
3.7. Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов системы биотрансформации ксенобиотиков у здоровых индивидов и в группе с онкопатологией 95
3.7.1. Анализ сочетаний генотипов полиморфных локусов в генах семейства интерлейкин-1 с геном биотрансформации ксенобиотиков НА1Э(Р)Н-хиноноксидоредуктаза-1 у онкобольных 104
3.8. Анализ сочетаний генотипов полиморфных локусов в генах семейства интерлейкин-1 и гене клеточного цикла ТР53 107
3.8.1. Анализ ассоциаций гаплотипов 112
Заключение 117
Выводы 118
Список цитированной литературы 120
