Введение
ЧАСТЬ I. Обзор литературы 23
Глава 1. Современные представления о механизмах врожденного иммунитета слизистых оболочек 23
1.1. Основные компоненты врожденного иммунитета 23
1.1.1. Распознающие рецепторы системы врожденного иммунитета 28
1.1.2. Эффекторные молекулы врожденного иммунитета (противомикробные пептиды) 40
1.2. Полиморфизм генов, белковые продукты которых участвуют в реакциях системы врожденного иммунитета 49
1.3. Характеристика и функции слизистых оболочек 60
1.3.1. Механизмы развития толерантности к комменсалам на уровне слизистых оболочек 61
1.3.2. Иммунные механизмы слизистых оболочек различной локализации 64
1.3.2.1. Слизистые оболочки бронхо-легочного и желудочно-кишечного трактов 64
1.3.2.2. Роль слизистых оболочек урогенитального тракта женщин в защите от патогенов 65
1.3.2.3. Факторы системы врожденного иммунитета в развитии инфекционной патологии на уровне слизистой оболочки в урогенитальном тракте мужчин 76
1.3.2.4. Особенности реакций системы врожденного иммунитета в тканях органа зрения человека
ЧАСТЬ II. Собственные исследования 89
Глава 2. Материалы и методы 89
2.1. Характеристика клинических групп 89
2.2. Материалы 95
2.3. Методы
2.3.1. Работа с культурами клеток 97
2.3.2. Оценка цитопатического действия вирусов герпеса in vitro и in vivo 98
2.3.3. Выделение нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) 99
2.3.4. Реакция обратной транскрипции 99
2.3.5. Полимеразная цепная реакция 100
2.3.6. Рестрикционный анализ 102
2.3.7. Электрофоретическое разделение ПЦР-продуктов 102
2.3.8. Выделение мононуклеарных клеток и нейтрофилов из периферической крови 103
2.3.9. Стимуляция клеток различными лигандами 103
2.3.10. Иммуноферментный анализ (ИФА) 104
2.3.11. Статистические методы анализа 104
Результаты и обсуждение 106
Глава 3. Оценка экспрессии генов молекул врожденного иммунитета в экспериментальных моделях инфекционного процесса in vitro и in vivo с помощью разработанных систем ОТ-ПЦР в режиме реального времени 106
3.1. Разработка систем ОТ-ПЦР в режиме реального времени для
оценки экспрессии генов Toll-подобных рецепторов, цитокинов, противомикробных пептидов и других молекул, участвующих в реакциях врожденного иммунитета 106
3.2. Определение экспрессии генов TLRs, дефенсинов и цитокинов в ответ на патогены в экспериментальных моделях in vitro и in vivo 121
3.2.1. Исследование факторов системы врожденного иммунитета на модели культуры перевиваемых линий клеток 122
3.2.2. Исследование экспрессии генов TLRs и выработки цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью и беременных с урогенитальной инфекцией.. 128
3.2.3. Динамика экспрессии и выработки нейтрофильных пептидов (сс-дефенсинов) нейтрофилами периферической крови здоровых беременных и беременных с урогенитальной инфекцией 134
3.2.4. Изучение экспрессии генов TLR9 BD-2 в эпителиальных клетках на модели герпетической инфекции in vivo 138
Глава 4. Комплексный анализ изменений показателей системы врожденного иммунитета у женщин с физиологически протекающей беременностью и у беременных с урогенитальной инфекцией 150
4.1. Исследование экспрессии/продукции TLRs, дефенсинов и цитокинов у женщин с инфекционной патологией при беременности 150
4.1.1. Изменение компонентов врожденного иммунитета в клетках слизистой цервикального канала и в периферической крови женщин с физиологически протекающей беременностью 150
4.1.2. Изменение показателей врожденного иммунитета (TLRs, дефенсинов) у женщин с неразвивающейся беременностью... 158
4.1.3. Исследование экспрессии генов TLRs и HBD-1 клетками слизистой цервикального канала беременных с урогенитальной инфекцией 166
4.2. Оценка роли TLR-опосредованного апоптоза в ткани плаценты при патологии инфекционного генеза у беременных женщин 181
4.2.1. Исследование экспрессии генов TLR2 и TLR4 в клетках плаценты 182
4.2.2. Экспрессия генов каспазы-8, каспазы-3 и ингибиторов каспазБЫР, XIAP в ткани плаценты 185
4.2.3. Анализ корреляционных связей уровней экспрессии генов каспаз, их ингибиторов и TLRs в клетках плаценты в исследуемых группах 191
4.3. Исследование ассоциации полиморфных маркеров в генах Toll-подобных рецепторов и противомикробных пептидов с патологией инфекционного генеза у беременных женщин 197
4.3.1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров Arg677Trp и Arg753Gln в гене TLR2 201
4.3.2. Изучение ассоциации полиморфных маркеров Asp299Gly и Thr399Ile в гене TLR4 206
4.3.3. Исследование ассоциации полиморфного маркера 2848G/A в гене TLR9 209
4.3.4. Изучение ассоциации полиморфных маркеров G(-20)A, C(-44)G, и G(-52)A гена DEFB1 211
4.3.5. Исследование ассоциации полиморфных маркеров в гене DEFB1 с уровнем экспрессии гена Р-дефенсина-1 220
Глава 5. Изучение роли TLRs, противомикробных пептидов и цитокинов на уровне слизистой уретры в патогенезе хронического простатита 226
5.1. Исследование изменения TLRs и противомикробных пептидов в клетках слизистой уретры при хроническом простатите 227
5.2. Изменение цитокинового профиля в семенной плазме и сыворотке периферической крови больных хроническим простатитом 231
Глава 6. Изучение роли компонентов врояоденного иммунитета (TLR9 и HBD-2) в слизистых оболочках глаза . 234
6.1. Изучение экспрессии генов TLR9 и HBD-2 в эпителиальных клетках конъюнктивы и роговицы здоровых детей 234
6.2. Изменение уровня экспрессии генов TLR9 и HBD-2 в эпителиальных клетках конъюнктивы и роговицы детей с герпетическим древовидным кератитом 236
6.3. Экспрессия генов TLR-9 и HBD2 в эпителиальных клетках конъюнктивы у детей, после проведенной противовирусной терапии 238
Глава 7. Заключение 241
Выводы 260
Список литературы
