Введение
Глава 1. Обзор литературы 14
1.1 Характеристика генов BCR, ABL, BCR-ABL и их белковых продуктов 15
1.2 Клиническая характеристика, диагностика и особенности терапии хронического миелолейкоза 19
1.3 Молекулярный мониторинг хронического миелолейкоза 24
1.4 Мехнизм арезистентности у больных хроническим миелолейкозом при лечении ИТК 26
1.4.1 BCR-ABL-зависимый механизм устойчивости 27
1.4.2 BCR-ABL-независимый механизм.устойчивости 30
1.5 Роль протоонкогенов и генов супрессоров опухолевого роста в этиологии ХМЛ и резистентности к лечению препаратами ИТК 34
1.6 Эпигенетическая регуляция хронического миелолейкоза 38
1.6.1 Митилирование 38
1.6.2 Роль микроРНК в развитии хронического миелолейкоза 39
Глава 2. Материалы и методы исследования 44
2.1 Материалы исследования 44
2.2Методы исследования 45
2.2.1 Выделение геномной ДНК 45
2.2.2 Выделение суммарной РНК 46
2.2.3 Синтез кДНК с помощью реакции обратной транскрипции 46
2.2.4 Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК 47
2.2.5 Рестрикционный анализ 51
2.2.6 Метод электрофореза 52
2.2.7 Определение нуклеотидной последовательности гена BCR-ABL 52
2.2.8 Количественная ОТ-ПЦР в режиме реального времени 52
2.2.9 Статистическая обработка результатов 54
Глава 3. Результаты и обсуждение 5 6
3.1 Анализ уровня экспрессии гена BCR-ABL в лейкоцитах периферической крови у больных хроническим миелолейкозом из РБ 56
3.2Анализ мутаций в гене BCR-ABL у больных из РБ 61
3.3 Анализ частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов генов, участвующих в метаболизме ИТК, у больных хроническим миелолейкозом. Изучение уровня экспрессии химерного гена у носителей различных генотипов исследованных полиморфных локусов 73
3.3.1 Анализ полиморфного варианта rs776746 гена изофермента цитохрома р450 CYP3A5 у больных хроническим миелолейкозом 73
3.3.2 Анализ полиморфного варианта rs683369 гена переносчика органических катионов hOCTl у больных хроническим миелолейкозом 76
3.4Анализ уровня экспрессии генов переносчиков лекарственных препаратов в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов
контрольной группы 79
3.4.1 Анализ уровня экспрессии гена переносчика ABCG2 в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов
контрольной группы 81
3.4.2 Анализ уровня экспрессии гена переносчика органических катионов hOCTl в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом
и индивидов контрольной группы 87
3.5 Анализ частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов в сайте связывания мкРНК в З -нетранслируемой области транскриптов гена BCR-ABL у больных хроническим миелолейкозом. Изучение уровня экспрессии химерного гена у носителей различных генотипов исследованных полиморфных локусов 94
3.6Анализ уровня экспрессии мкРНК-203, мкРНК-196 и мкРНК-323, в
клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови
больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной
группы 101
3.6.1 Анализ уровня экспрессии мкРНК-203 в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной группы 103
3.6.2 Анализ уровня экспрессии мкРНК-196 в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной группы 106
3.6.3 Анализ уровня экспрессии мкРНК-323 в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной
группы 111
3.7Анализ уровня экспрессии генов онкосупрессоров в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной
группы 116
3.7.1 Анализ уровня экспрессии гена тирозиновой фосфатазы PTPN1 в клеточной линии К562, у больных хроническим миелолейкозом и индивидов контрольной группы 116
3.7.2 Анализ уровня экспрессии гена нейрофиброматоза первого типа NF1 в клеточной линии К562, в лейкоцитах периферической крови больных хроническим миелолейкозом
и индивидов контрольной группы 124
Заключение 132
Выводы 141
Список литературы 143
