Введение
Глава 1. Молекулярно-клеточные основы нейроиммуноэндокринной функции Тимуса 22
1.1. Клеточная биология и гистофизиология тимуса 25
1.2. Нейроиммуноэндокринные сигнальные молекулы тимуса 41
1.2.1. Тимические гормоны 41
1.2.2. Гормоны нетимусного происхождения, синтезируемые в эпителиальных клетках и экспрессируемые лимфоцитами и клетками микроокружения тимуса 48
1.3. Нейроиммуноэндокринные сигналы в функционировании тимуса 72
Глава 2. Биология развития и старение Тимуса 79
2.1. Эмбриогенез тимуса 79
2.2. Дифференцировка и иммуноцитохимические фенотипы клеток тимуса 79
2.3. Регуляция функционирования тимуса в онтогенезе 83
2.4. Возрастная инволюция тимуса и старение 90
2.5. Роль пептидов как потенциальных иммуногеропротекторов 97
Глава 3. Материал и методы исследования 116
3.1. Общий дизайн и направления исследований 116
3.1.1. Исследование онтогенеза и старения тимуса in vivo 116
3.1.2. Исследование дифференцировки и старения клеток тимуса in vitro.. 117
3.1.3. Изучение пептидергической регуляции дифференцировки иммунокомпетентных стволовых клеток in vitro 118
3.2. Молекулярно-биологические методы 119
3.3. Цитологические и иммуноцитохимические методы 120
3.4. Иммунофлуоресцентная конфокальная микроскопия 128
3.5. Электронно-микроскопические методы 129
3.6. Компьютерный анализ микроскопических изображений 131
3.7. Статистическая обработка результатов 131
Глава 4. Структурно-функциональные особенности онтогенеза и старческой инволюции Тимуса 133
4.1. Общие закономерности структурно-функциональных изменений тимуса в процессе онтогенеза и при старении 133
4.2. Ультраструктура Т-лимфоцитов в процессе старения железы 141
4.3. Ультраструктура микроокружения тимуса при старении железы 143
4.3.1. Ультраструктура эпителиальных клеток тимуса при старении железы 143
4.3.2. Ультраструктура тучных клеток тимуса при старении железы 144
4.3.3. Ультраструктура дендритных клеток тимуса при старении железы 146
4.3.4. Ультраструктура макрофагов тимуса при старении железы 147
4.3.5. Ультраструктура капилляров микроокружения тимуса при старении железы 149
Глава 5. Экспрессия нейроиммуноэндокринных сигнальных молекул в тимусе человека в процессе онтогенеза 150
5.1. Иммуноцитохимическая и электронно-микроскопическая верификация экспрессии биогенных аминов и пептидных гормонов 150
5.1.1. Возрастные особенности экспрессии серотонина и эндотелина-1 в клетках тимуса человека 154
5.2. Возрастные особенности экспрессии сигнальных факторов дифференцировки эпителиальных клеток Paxl, НохаЗ и TLP 170
5.3. Возрастные особенности экспрессии сигнального фактора дифференцировки дендритных клеток CD35 177
5.4. Иммуноцитохимическая верификация экспрессии ключевых регуляторных белков пролиферации и апоптоза 182
5.4.1. Пролиферативная активность тимоцитов в постнатальном онтогенезе 183
5.4.2. Апоптоз клеток тимуса в онтогенезе и при старении 187
5.5. Иммуноцитохимическая верификация экспрессии NO-синтазы в тимусе человека в онтогенезе и при старении 194
Глава 6. Мелатонин и старение иммунокомпетентных клеток in vitro 201
6.1. Влияние мелатонина на клетки тимуса при старении культур 202
6.1.1. Маркеры активации, тимулин и цитокины 202
6.1.2. Пролиферативная активность эпителиальных клеток 205
6.1.3. Экспрессия белков ядрышковых организаторов 207
6.2. Действие мелатонина на периферические Т-лимфоциты 208
6.2.1. Пролиферация и апоптоз 208
6.2.2. Экспрессия внутриклеточных цитокинов 209
Глава 7. Пептидергическая регуляция дифференцировки иммунокомпетентных стволовых клеток человека 212
7.1. Влияние пептидов на дифференцировку клеток миелоидного и лимфоидного рядов 212
7.1.1. Экспрессия маркеров миелоидных клеток, Т-, В-лимфоцитов HNK-КЛЄТОК 213
7.1.2. Оценка реализации эффекта пептидов через действие на стволовые клетки или ранние клетки-предшественники, экспрессирующие CD34 217
7.2. Влияние пептидов на дифференцировку тимоцитов 220
7.2.1. Влияние пептидов на экспрессию маркеров Т-клеток и их субпопуляций 221
7.2.2. Влияние пептидов на дифференцировку естественных регуляторных CD4+CD25+ Т-клеток 226
7.3. Пептидергическая регуляция формирования иммунофенотипов лимфоцитов периферической крови человека 228
7.3.1. Влияние пептидов на мембранный фенотип лимфоцитов крови 228
7.3.2. Экспрессия корецепторов Т-клеток и молекулы CD25 на популяциях мононуклеаров крови человека, освобожденных от клеток, несущих один из корецепторов (CD4 или CD8) 235
7.4. Иммуноцитохимическое и электронно-микроскопическое изучение действия пептидов на дифференцировку стволовых клеток лимфоидного ряда тимуса человека 239
7.4.1. Иммуноцитохимическое изучение коммитированных клеток лимфоидного ряда на различных стадиях их дифференцировки из стволовых клеток 240
7.4.2. Электронно-микроскопическое изучение коммитированных клеток лимфоидного ряда на различных стадиях их дифференцировки из стволовых клеток 255
7.4.3. Пептидергическая регуляция экспрессии сигнальных факторов дифференцировки ТЭК при старении культур 266
Глава 8. Молекулярная нейроиммуноэндокринология тимуса и старение 274
8.1. Структурно-функциональные изменения тимуса в процессе онтогенеза и при старении 274
8.2. Особенности экспрессии нейроиммуноэндокринных сигнальных молекул в тимусе человека в процессе онтогенеза 279
8.3. Роль мелатонина в механизмах старения иммунокомпетентных клеток 288
8.4. Пептидергаческая регуляция дифференцировки иммунокомпетентных клеток в онтогенезе и при старении 292
Заключение 297
Выводы 302
Практические рекомендации 307
Указатель литературы 308
