Введение
Глава 1. Обзор литературы
1.1 Внутриклеточные газовые посредники регуляторы клеточных функций 14
1.1.1 Оксид азота как участник внутриклеточной сигнальной трансдукции 16
1.1.2 Монооксид углерода как участник внутриклеточной сигнальной трансдукции 19
1.1.3 Сульфид водорода как участник внутриклеточной сигнальной трансдукции 22
1.1.4 Фармакологические агенты, содержащие газовые трансмиттеры, в качестве основных действующих веществ 26
1.2 Молекулярные механизмы, определяющие баланс апоптоза и пролиферации клеток 28
1.2.1 Молекулярные механизмы регуляции программированной гибели клеток 28
1.2.2 Молекулярные механизмы регуляции клеточного цикла 36
1.2.3 Регуляторные молекулы апоптоза и пролиферации клеток 41
1.2.3.1 р38 митоген-активируемая протеинкиназа 41
1.2.3.2 Транскрипционный фактор р53 42
1.3 Роль газотрансмиттеров в регуляции апоптоза и клеточного цикла 43
1.3.1 Физиологические мишени действия газов в регуляции апоптоза и клеточного цикла 43
1.3.2 Роль газотрансмиттеров в дизрегуляции апоптоза и пролиферации опухолевых клеток 46
Заключение 50
Глава 2. Материал и методы исследования 55
2.1. Материал исследования 55
2.1.1 Экспериментальные модели исследования 56
2.2 Методы исследования 58
2.2.1 Культивирование клеточной линии Jurkat 59
2.2.2 Выделение и культивирование мононуклеарных лейкоцитов венозной крови з
2.2.3 Культивирование клеток в условиях воздействия доноров газотрансмиттеров и ингибирования р38 МАРК-зависимых механизмов их действия 63
2.2.4 Оценка реализации апоптоза клеток 64
2.2.5 Оценка распределения клеток по фазам клеточного цикла 65
2.2.6 Оценка продукции активных форм кислорода 66
2.2.7 Оценка митохондриального трансмембранного потенциала 68
2.2.8 Оценка количества TNF R1-позитивных клеток 69
2.2.9 Оценка продукции TNF-a 70
2.2.10 Оценка уровня экспрессии мРНК генов белков-регуляторов апоптоза и клеточного цикла 71
2.2.11 Определение активности каспазы-3 и -9 75
2.2.12 Оценка содержания белков-регуляторов апоптоза и клеточного цикла 77
2.2.13 Статистический анализ результатов исследования 78
Глава 3. Направленность апоптотических изменений клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов в ответ на воздействие доноров газов оксида азота, монооксида углерода и сульфида водорода 80
3.1 Апоптоз клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов в ответ на воздействие доноров оксида азота 80
3.2 Апоптоз клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов в ответ на воздействие донора монооксида углерода 92
3.3 Апоптоз клеток линии Jurkat и мононуклеарных лейкоцитов в ответ на воздействие донора сульфида водорода 98
3.1.4 Молекулярные мишени, опосредующие дизрегуляцию апоптоза в опухолевых клетках 106
Глава 4. Молекулярные механизмы участия газовых трансмиттеров в дизрегуляции апоптоза и пролиферации опухолевых клеток 109
4.1 Распределение клеток по фазам клеточного цикла при воздействии доноров газов 109
4.2 Участие редокс-сигнализации в опосредуемой газами дизрегуляции апоптоза и клеточного цикла в опухолевых клетках 115
4.2.1 Особенности генерации активных форм кислорода при воздействии на клетки доноров газов 115
4.2.2 Роль р38 МАРК в опосредованной газовыми трансмиттерами дизрегуляции апоптоза и пролиферации клеток линии Jurkat 123
4.3 Влияние газотрансмиттеров на процессы реализации апоптоза опухолевых клеток 134
4.3.1 Молекулярные механизмы митохондриальной дисфункции при воздействии на клетки доноров газов 134
4.3.2 Нарушения регуляция активности каспаз 3 и 9 при воздействии на клетки линии Jurkat доноров газотрансмиттеров 146
4.4 Нарушения регуляции продолжительности G1 фазы клеточного цикла клеток линии Jurkat при воздействии доноров газов 156
4.5 Механизмы изменения содержания ключевых белков-регуляторов апоптоза и клеточного цикла при воздействии на клетки линии Jurkat доноров газов 165
4.6 Молекулярные мишени действия р38 МАРК в опосредованной газами дизрегуляции апоптоза опухолевых клеток 183
Заключение 192
Выводы 198
Список использованных сокращений 201
Список литературыq
