Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 17
1.1. Общая характеристика, биосинтез, метаболизм и функции L карнитина у млекопитающих 17
1.1.1. Биосинтез и метаболизм L-карнитина 17
1.1.2. Потребность человека в L-карнитине. кишечное всасывание. фармакокинетика и реабсорбция в почках 20
1.1.3. Транспорт L-карнитина а ткани и органеллы 25
1.1.4. Функции L-карнитина в организме млекопитающих 27
1.1.5. Карнитинацил-трансферазы 28
1.1.6. Роль L-карнитина и карнитинацил-трансфераз в регуляции внутриклеточного пула КоА и КоА-зависимых процессов
1.2. Экспериментальная и клиническая фармакология L-карнитина 33
1.3. Нарушения обмена L-карнитина у человека и животных
1.3.1. Клинические аспекты недостаточности L-карнитина 40
1.3.2. Нарушения обмена L-карнитина при экспериментальном и клиническом алкоголизме 46
1.3.3. Нарушения обмена L-карнитина при введении вальпроевой кислоты 49
1.3.4. Нарушения обмена L-карнитина при нарушениях питания и недостаточности витаминов 51
1.4. Патофизиологические механизмы токсичности этанола. вальпроевой кислоты, недостаточности рибофлавина и биоти на 52
1.4.1. Молекулярные механизмы алкогольного поражения печени з
1.4.2. Молекулярные механизмы токсичности вальпроевой кислоты 57
1.4.3. Биохимические нарушения при недостаточности рибофлавина 61
1.4.4. Биохимические нарушения при недостаточности биотина 63
ГЛАВА II. Материал и методы исследования 66
2.1. Экспериментальные модели 66
2.1.1. Моделирование алкогольного поражения печени у крыс и мышей 66
2.1.2. Моделирование острой алкогольной интоксикации у крыс 67
2.1.3. Введение вальпроевой кислоты крысам 67
2.1.4. Моделирование недостаточности рибофлавина у крыс 68
2.1.5. Моделирование недостаточности биотина у крыс 69
2.2. Методы исследования 69
2.2.1. Выделение гепатоцитов и непаренхиматозных клеток (клетки Купфера) из печени крыс 69
2.2.2. Выделение лимфоцитов из крови крыс 70
2.2.3. Определение концентрации креатинина в моче 71
2.2.4. Определение уровня рибофлавина и флавинмононуклеотида в печени методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) 71
2.2.5. Определение концентрации биотина в плазме крови 72
2.2.6. Определение содержания летучих жирных кислот (С2 - Сй) в физиологических жидкостях и тканях методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) 72
2.2.7. Определение концентрации жирных кислот в фосфолипидах лимфоцитов крови 73
2.2.8. Определение концентрации органических кислот в физиологических жидкостях и тканях методом капиллярной газовой хроматографии 73
.9. Определение концентрации общего и свободного L-карнитина в плазме крови, тканях и моче 76
.10. Определения концентрации ацшжарнитинов в тканях и физиологических жидкостях методом тандемной хроматомасс спектрометрии (FAB-MS/MS) 77
.11. Определение концентрации свободных аминокислот в тканях и плазме крови 79
.12. Определение концентрации тригли церидов. общих липидов. общих фосфолипидов. холестерина, фракций фосфолипидов в тканях 80
.13. Микроскопия и оценка гистологических параметров печени 81
.14. Определение показателей перекисного окисления липидов 81
. 15. Определние активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) в плазме крови и цитохрома Р450 (CYP2E1) в гепатоцитах 83
.16. Определение концентрации этанола в крови 83
.17. Определение концентрации цитокинов. простагландина Е2 и N0 в плазме крови и культуральных средах 84
.18. Выделения общей РНК. синтез кДНК и определение экспрес сии генов цитокинов 85
.19. Анализ экспрессии генов ферментов биосинтеза карнитина и карнитин-ассоциированных белков в печени методом микро чип-экспрессионной технологии 86
Методы статистической обработки результатов 87
ГЛАВА III. Результаты собственных исследований патофизиологические механизмы алкоголь ного поражения печени; роль l карнитина 88
1. Влияние L-карнитина на выраженность поражения печени и биохимических нарушений при алкогольной интоксикации 88
2. Влияние алкогольной интоксикации на экспрессию генов ферментов биосинтеза карнитина и карнитин-ассоциированных белков в печени 93
.3. Роль L-карнитина в модуляции функциональной активности клеток Купфера при алкогольной интоксикации 95
Патофизиологические механизмы гепатоток сичности валытроевой кислоты; роль l карнитина 98
-1. Влияние L-карнитина на обмен липидов у крыс при введении вальпроата 98
-2. Влияние L-карнитина на активность перекисного окисления липидов у крыс при введении вальпроата 103
.3. Влияние L-карнитина на формирование пула свободных аминокислоту крыс при введении вальпроата 107
Молекулярные механизмы нарушений обмена l-карнитина при недостаточности рибофлави на у крыс 118
1. Влияние недостаточности рибофлавина на экскрецию органических кислот и глициновых конъюгатов 118
2. Влияние недостаточности рибофлавина на концентрацию ко роткоцепочечных и дикарбоновых органических кислот в
тканях и плазме крови 123
3. Влияние недостаточности рибофлавина на уровень фракций L-карнитина в тканях и плазме крови 126
.4. Влияние недостаточности рибофлавина на концентрацию ацилкарнитинов в тканях и биологических жидкостях 129
3.4. Молекулярные механизмы нарушений обмена l-карнитина при недостаточности биотина у крыс 137
3.4.1. Влияние недостаточности биотина на обмен органических кислот и короткоцепочечных жирных кислот 137
3.4.2. Влияние недостаточности биотина на композицию жирных кислот фосфолипидов лимфоцитов 141
3.4.3. Влияние недостаточности биотина на содержание фракций L-карнитнна в тканях и биологических жидкостях 147
3.4.4. Влияние недостаточности биотина на концентрацию ацил карнитинов в тканях и биологических жидкостях 150
Обсуждение полученных результатов 155
Заключение 178
Выводы 180
Практические рекомендации 182
Список литературы
