Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 12
1.1. Современные представления о микроспоридиях 12
1.2. Жировое тело насекомых 27
ГЛАВА 2. Материал и методы 37
2.1. Работа с саранчой, ее заражение и выделение стадий жизненного цикла микроспоридий из насекомых 37
2.2. Выделение геномной ДНК и мРНК P. locustae 39
2.3. Компьютерный анализ генома P. locustae и подбор праймеров 40
2.4. Оценка уровня экспрессии генов P. locustae методом ОТ ПЦР 41
2.5. ПЦР-амплификация и клонирование выбранных генов 42
2.6. Гетерологическая экспрессия генов P. locustae в Е. coli 44
2.7. Выделение рекомбинантных белков и получение поликлональных антисывороток 44
2.8. Приготовление проб нативных белков P. locustae и иммуноблотинг 46
2.9. Иммуномечение криосрезов зараженного жирового тела саранчи 47
ГЛАВА 3. Поиск, клонирование и гетерологическая экспрессия секреторных белков микроспоридии Paranosema locustae 49
3.1. Компьютерный анализ генов секреторных белков микроспоридии Р. locustae 49
3.2. Анализ уровня экспрессии генов секреторных белков микроспоридии Р. locustae в спорах и стадиях внутриклеточного развития паразита 55
3.3. Клонирование и гетерологичная экспрессия в бактериях Е. coli генов секреторных белков микроспоридии P. locustae з
ГЛАВА 4. Анализ содержания секреторных белков микроспоридии Paranosema locustae в клетках паразита и хозяина 62
4.1. Подготовка проб зараженного жирового тела саранчи 62
4.2. Анализ содержания секреторных белков P. locustae в жировом теле саранчи методом иммуноблоттинга 68
4.3. Иммунолокализация секреторных белков P. locustae на криосрезах зараженного жирового тела саранчи, определенная методами иммунофлюоресцентной и конфокальной микроскопии 78
Заключение 85
Выводы 89
Список литературы
