Введение
Глава 1. Обзор литературы 9
1.1. РНКазы 9
1.1.1. Бактериальные РНКазы семейства Т1 9
1.2. Цитотоксичность РНКаз 11
1.2.1. Цитотоксичные РНКазы животных 11
1.2.2. Цитотоксические свойства РНКаз растительного происхождения 13
1.2.3. Цитотоксические свойства РНКаз грибов 15
1.2.4. Цитотоксические свойства бактериальных РНКаз 16
1.2.5. Механизм цитотоксического действия РНКаз 1.2.5.1. Интернализация РНКаз 18
1.2.5.2. Внутриклеточные мишени цитотоксичных РНКаз 21
1.2.5.3. Клеточные ответы на действие цитотоксичных РНКаз 29
1.3. Исследование противоопухолевого действия РНКаз на уровне организма 32
Глава 2. Материалы и методы исследований 35
2.1. Объекты и материалы 35
2.1.1. Бактериальные РНКазы 35
2.1.2. Клеточные культуры 35
2.1.3. Лабораторные животные и опухолевые модели 35
2.2. Методы исследований 36
2.2.1. Выделение и очистка биназы 36
2.2.2. Определение концентрации и каталитической активности РНКаз 39
2.2.3. Определение количества клеток 40
2.2.4. Оценка жизнеспособности клеток 40
2.2.5. Оценка параметров клеток методом проточной цитометрии 41
2.2.6. Иммуноблоттинг 46
2.2.7. Оценка экспрессии генов з
2.2.8. Метод измерения клеточного индекса 53
2.2.9. Морфологические методы 54
2.2.10. Статистический анализ 55
Глава 3. Результаты и их обсуждение 56
3.1. Молекулярные детерминанты цитотоксического действия биназы на злокачественные клетки 56
3.1.1. Цитотоксическое и цитостатическое действие биназы на клетки Касуми-1 56
3.1.2. Влияние биназы на изменение экспрессии апоптических генов в клетках Касуми-1 59
3.1.3. Влияние биназы на реализацию NF-B-зависимых сигнальных путей в клетках Касуми-1 62
3.1.4. Влияние биназы на внутриклеточные параметры клеток Касуми-1 62
3.1.5. Влияние ингибирования Akt1/2 киназ в клетках Касуми-1 на их чувствительность к действию биназы 71
3.1.6. Механизм апоптического действия биназы на клетки Касуми-1 74
3.1.7. Роль экспрессии тирозинкиназы KIT в чувствительности клеток нейробластом к цитотоксическому действию биназы 77
3.1.8. Цитотоксическое действие биназы на клетки острого Т-лимфобластного лейкоза 81
3.2. Влияние изменения общего заряда молекулы РНКазы Sa на ее цитотоксичность по отношению к клеткам Касуми-1 88
3.3. Влияние биназы на печень животных в модели карциномы легких Льюиса 96
Выводы 104
Список сокращений и условных обозначений 105
Приложение 108
Благодарности 111
Список литературы
