Введение
Глава 1. Обзор литературы 11
1.1. Механизм действия бета-лактамных антибиотиков 11
1.2. Механизмы антибактериальной устойчивости 11
1.3. Классификация и происхождение бета-лактамаз 13
1.4. Характеристика сериновых бета-лактамаз 17
1.4.1. Бета-лактамазы класса А 17
1.4.2. Бета-лактамазы класса С 23
1.4.3. Бета-лактамазы класса D 27
1.5. Характеристика металло-бета-лактамаз (МБЛ) 28
1.6. Генетическая локализация бета-лактамаз 30
1.6.1. Генетическая локализация сериновых бета-лактамаз класса А 30
1.6.2. Генетическая локализация МБЛ 32
1.6.3. Генетическая локализация сериновых бета-лактамаз класса С 33
1.7. Клиническое значение бета-лактамаз 34
1.7.1. Клиническое значение бета-лактамаз расширенного спектра (БЛРС) 34
1.7.2. Клиническое значение бета-лактамаз АтрС 34
1.7.3. Клиническое значение МБЛ 36
1.8. Детекция бета-лактамаз 37
1.8.1. Критерии чувствительности грамотрицательных микроорганизмов к бета-лактамным антибиотикам (БЛА) 37
1.8.2. Фенотипические методы детекции бета-лактамаз 40
1.8.3. Молекулярные методы в исследовании феномена устойчивости к БЛА 44
1.9. Белковое моделирование 49
Глава 2. Материалы и методы исследования 53
2.1. Бактериальные штаммы 53
2.2. Анализ фенотипов антибиотикорезистентности 54
2.2.1. Определение чувствительности к антимикробным препаратам 54
2.2.2. Фенотипические тесты на наличие бета-лактамаз 55
2.3. Идентификация штаммов методом прямого белкового профилирования 57
2.4. Генетический анализ исследуемых штаммов 59
2.4.1. Определение нуклеотидной последовательности гена 16SpPHK 59
2.4.2. Выявление генетических маркеров устойчивости к БЛА 59
2.5. Моделирование пространственной структуры новой бета-лактамазы AmpC-new методом предсказания структуры по гомологии 62
Глава 3. Результаты 64
3.1 Использование метода прямого белкового профилирования для идентификации микроорганизмов, включенных в исследование 64
3.2 Анализ чувствительности к антибиотикам грамотрицательных микроорганизмов - возбудителей нозокомиальных инфекций 72
3.2.1. Анализ профилей чувствительности клинических изолятов К. pneumonia 72
3.2.2. Анализ профилей чувствительности клинических изолятов представителей семейства Enterobacteriaceae (кроме К. pneumoniae) 76
3.2.3. Анализ профилей чувствительности клинических изолятов A. haumanii 79
3.2.4. Анализ профилей чувствительности клинических изолятов P. aeruginosa 83
3.3. Расшифровка механизмов устойчивости к БЛА у грамотрицательных микроорганизмов - возбудителей нозокомиальных инфекций 89
3.3.1. Расшифровка механизмов устойчивости К. pneumoniae к БЛА 89
3.3.2. Расшифровка механизмов устойчивости у представителей семейства Enterobacteriaceae (кроме 93 К. pneumoniae) к БЛА
3.3.2.1. Случаи выявления AmpC у изолятов семейства Enterobacteriaceae .-: 96
3.3.2.2. Случай выявления МБЛ у штамма E.coli 100
3.3.3. Расшифровка механизмов устойчивости A. baumanii к БЛА 102
3.3.4. Расшифровка механизмов устойчивости Р. aeruginosa к БЛА 103
3.4. Оценка чувствительности и специфичности фенотипических тестов для выявления бета-лактамаз различных классов 104
3.4.1. Применение теста с клавулановой кислотой для выявления штаммов, продуцирующих БЛРС 104
3.4.2. Применение трехмерного АтрС-теста для выявления штаммов, продуцирующих бета-лактамазы класса С. 106
3.4.3. Применение метода двойных дисков с этилен-диамин-тетрауксусной кислотой для выявления штаммов, продуцирующих МБЛ 108
Глава 4. Обсуждение 109
Заключение 121
Выводы 122
Список литературы 12
