Введение
Глава 1. Мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (МСК) периваскулярной локализации как компонент мезенхимального резерва организма 17
1.1. Идентификация МСК in situ 18
1.2. Выявление перицитоподобных клеток in situ 20
1.3. Характеристика перицитоподобных клеток in vitro 26
1.4. Факторы микроокружения в тканевых (физиологических) нишах малодифференцированных стромальных клеток 33
Глава 2. Морфологические и функциональные особенности МСК из стромально-васкулярной фракции жировой ткани человека (жтМСК) при тканевом («физиологическом «) содержании О2 34
2.1. Морфология, иммунофенотип, жизнеспособность 36
2.2. Пролиферация и миграция 42
2.2.1. Влияние концентрации факторов роста на пролиферацию 44
2.2.2. Влияние плотности посадки на пролиферативную активность и жизнеспособность 46
2.3. Дифференцировка 49
2.4. Клеточные органеллы и внутриклеточные активные формы кислорода (АФК) 58
2.5. Секреторная активность 61
Глава 3. Влияние «физиологической» гипоксии на транскриптом жт МСК 72
3.1. Биологические процессы, с которыми связаны гены с измененной экспрессией 77
3.2. Изменение экспрессии HIF и регулируемых ими генов 80
3.3. Дифференциальная экспрессия генов, кодирующих продукты, регулирующие пролиферацию 85
3.4. Изменение экспрессии генов основных компонентов цитоскелета, белков соединительнотканного матрикса и ключевых молекул, участвующих в его ремоделировании 86
3.5. Анализ дифференциальной экспрессии генов, кодирующих биологически активные медиаторы 88
3.6. Изменение экспрессии генов, связанных с «пластичностью» жтМСК 91
3.7. Дифференциальная экспрессия генов, продукты которых вовлечены в межклеточные взаимодействия 91
Глава 4. Взаимодействие мультипотентных мезенхимальных стромальных и иммунокомпетентных клеток 94
4.1. Иммуносупрессивные эффекты МСК 95
4.2. Механизмы реализации иммуномодуляторных эффектов МСК 97
4.3. Влияние факторов микроокружения на иммуномодуляторные эффекты МСК 101
4.4. Характеристика взаимодействия жтМСК с аллогенными МНК при различном содержании О2 в микроокружении 103
4.4.1. Анализ суспензионной фракции МНК в монокультуре и сокультуре с жтМСК 100
4.4.2. Характеристика фракции МНК, прикрепленных к жтМСК 107
Глава 5. Гемопоэз-поддерживающая активность жтМСК при тканевом уровне О2 в микроокружении 118
5.1. МСК. как компонент кроветворной ткани 118
5.2. Паракринные и контактные взаимодействия в гемопоэтической нише 120
5.3. Концентрация О2, как фактор регуляции функций стволовых и прогениторных клеток 123
5.4. Моделирование кроветворного микроокружения ex vivо 126
5.5. Компарментализация ГСПК при взаимодействии с МСК in vitro 127
5.6. Модификация межклеточного взаимодействия стромальных и гемопоэтических предшественников в условиях пониженного содержания О2 130
5.6.1. Взаимодействие пкМНК и жтМСК при различном содержании О2 в среде культивирования 132
5.6.1.1. Характеристика суспензионной фракции пкМНК-1 после сокультивирования с жтМСК при 20% и 5% О2 134
5.6.1.2. Характеристика адгезированных пкГСПК-0 после сокультивирования с жтМСК при 20% и 5% О2 140
5.6.1.3. Влияние жтМСК и различной концентрации О2 на гемопоэтические клетки-потомки пкГСПК-0 (популяции пк-ГСПК1,2) 148
5.6.2. Паракринные медиаторы и молекулы, опосредующие контакты пкГСПК 4
1,2 и жтМСК 159
Глава 6. Использование МСК из жировой ткани для стимуляции ранних этапов формирования костной мозоли при экспериментальном переломе у крыс 168
Заключение 173
Выводы 182
Список сокращений 184
Список литературы
