Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 15
1.1. Спектр мутаций, индуцированных алкилирующими веществами 16
1.2. Эксцизионная репарация оснований 17
1.2.1. 3-метиладенин-ДНК гликозилазы 20
1.3. Адаптивная репарация 20
1.3.1. Репарация 06-алкилгуанина 21
1.3.2. 06-метилгуанин-ДНК метилтрансферазы Е. coli 22
1.3.3. Роль сигма-факторов РНК-полимеразы в механизме регуляции экспрессии генов адаптивного ответа 25
1.3.4. Терминация адаптивного ответа 27
1.4. SOS-зависимый механизм, индуцированный МННГ, в клетках Е. coli 28
1.5. Современная модель SOS-ответа Е. coli 29
1.6. Связь между адаптивной репарацией и SOS-системой 32
1.7. Эксцизионная репарация нуклеотидов 32
1.7.1. UvrABC эндонуклеаза Е. coli 33
1.7.2. Взаимодействие между UvrA и UvrB белками - феномен узнавания повреждения ДНК 35
1.7.3. Эксцизионная репарация нуклеотидов, сопряженная с транскрипцией 37
1.8. Предпочтительная репарация 06-метилгуанина на транскрибируемой нити ДНК 38
ГЛАВА 2. Объекты и методы исследования 40
2.1. Штаммы Я coli 40
2.2. Инкубационные среды, антибиотики, химические вещества 41
2.3. Ингибирование транскрипции и трансляции в клетках Е. coli 42
2.4. Определение (3-галактозидазы 42
2.5. Определение РНК в клетках 44
2.6. Выделение плазмидной ДНК 45
2.7. Электрофорез в агарозном геле 46
2.8. Трансформация 46
2.9. Биолюминесцентный анализ - SOS-Lux тест 47
2.10. Оценка частоты индуцированных мутаций 47
ГЛАВА 3. Результаты исследования 50
3.1. Сравнительный анализ ответов клеток штаммов Е. coli группы В и К12 на мутагенное, бактерицидное и генотоксическое действие МННГ и МННГ в комбинации с рифампицином и хлорамфениколом 50
3.2. Индуцированный мутагенез в делящихся и неделящихся клетках Е. coli 60
3.2.1. Влияние рН инкубационной средына индуцированный мутагенез в культурах клеток логарифмической и стационарной фаз роста Е. coli 61
3.2.2. Ингибирование синтеза Б-галактозидазы хлорамфениколом и ингибирование синтеза РНК рифампицином 65
3.2.3. Влияние ингибиторов процессов транскрипции или трансляции на мутагенное и бактерицидное действие МННГ 67
3.2.4. Влияние рН инкубационной среды на индуцированный мутагенез в адаптированных к МННГ клетках культур логарифмической и стационарной фаз роста Е. coli 72
3.2.5. Влияние ингибиторов процесса транскрипции или трансляции на индуцированный мутагенез и бактерицидное действие МННГ в адаптированных к МННГ клетках Е. coli 76
3.3. Влияние осмотического стресса и ингибирования процессов транскрипции или трансляции на индуцированный мутагенез в Е. coli 79
3.4. Влияние осмотического стресса и ингибирования процессов транскрипции или трансляциина индуцированный мутагенез в адаптированных к МННГ клетках Е. coli 87
3.5. Экспрессия LexA-контролируемой транскрипционной сшивки рсda: iluxCDABE в делящихся и неделящихся клетках Е. coli 92
Обсуждение результатов 99
Выводы 112
Список литературы 113
