Введение
Обзор литературы 8
Способы измерения активности ферментов в интактных митохондриях 8
Аламетицин как инструмент для изучения внутримитохондриальных ферментов 9
Препараты Комплекса I и катализируемые ими реакции 12
Структура фермента 15
Гистерезисное поведение Комплекса 1 23
Возможные способы регулирования фермента in vivo 28
Реакционноспособность SH-групп в белках 30
Методы исследования 38
Препаративные методы 38
Выделение митохондрий сердца быка 38
Получение субмитохондриалъных частиц 39
Получение препарата активированных и деактивированных субмитохондриальных частиц 40
Получение препарата изолированного Комплекса 1 40
Получение препарата митохондрий сердца крысы 41
Получение препарата митохондрий, обработанных аламетицином 42
Подготовка препарата митохондрий к электронной микроскопии 42
Аналитические методы 43
Измерение малат/глутамат-оксидазной реакции и величины дыхательного контроля 43
Измерение NADH:Ql-pedyKma3Hou активности 44
Измерение NADH-оксидазной активности 44
Измерение изоцитратдегидрогеназной активности 45
Измерение аконитазной активности 45
Измерение сукцинат-оксидазной активности 45
Измерение АТРазной активности 46
Изучение набухания митохондрий по изменению светорассеивания 46
Определение белка 46
Результаты и их обсуждение 47
Влияние аламетицина на свойства препаратов митохондрий, субмитохондриальных частиц и изолированного Комплекса 1 47
Влияние ионов магния на NADH-оксидазную активность митохондрий 53
Ультраструктура митохондрий сердца крысы, обработанных аламетицином 56
Аконитазная и изоцитратдегидрогеназная активности митохондрий сердца крысы до и после обработки аламетицином 62
Кинетика деактивации Комплекса І в митохондриях и субмитохондриальных частицах 66
Локализация SH-группы, меняющей реакционноспособностъ при деактивации Комплекса I. 69
Общее содержаниереакционноспособных SH-групп в препаратах митохондрий сердца крысы и СМЧ сердца быка 72
Реакционноспособность SH-группы Комплекса 1 74
Выводы 84
Список литературы 86
