Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы 10
1.1 Основные этапы формирования иммунного ответа на Mycobacterium tuberculosis 10
1.2 Интерферон-гамма как основной лимфоцитарный фактор защиты против Mycobacterium tuberculosis 14
1.3 Современные представления о функционировании JAK-STAT-сигнальной системы 17
1.3.1 Механизмы внутриклеточной JAK-STAT-сигнализации 17
1.3.2 Тирозиновые киназы семейства JAK 20
1.3.3 Транскрипционные факторы STAT 22
1.3.4 Транскрипционный фактор T-bet и его роль в JAK-STAT-сигнальной
системе 26
1.4 Основные и альтернативные пути секреции IFN-y в иммунном ответе на
Mycobacterium tuberculosis 28
1.4.1 СБЗ/ТСК-опосредованная и 1Ь-12/1Ь-27-зависимая секреция IFN-y Thl лимфоцитами 28
1.4.2 Альтернативные пути секреции IFN-y при микобактериальной инвазии 32
ГЛАВА 2. Материал и методы исследования 39
2.1 Объект исследования 39
2.2 Материал исследования 42
2.3 Методы исследования 42
2.3.1 Определение общего количества лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови 42
2.3.2 Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови 43
2.3.3 Выделение лимфоцитов из взвеси мононуклеарных лейкоцитов методом адгезии к пластику 44
2.3.4 Подсчет количества и определение жизнеспособности лимфоцитов в суспензии 44
2.3.5 Специфическая индукция Т-лимфоцитов з
2.3.6 Приготовление лизатов лимфоцитов периферической крови 47
2.3.7 Определение содержания активных форм транскрипционных факторов STAT1 и STAT4 в лизатах лимфоцитов 48
2.3.8 Определение содержания активных форм тирозиновых киназ JAK1, JAK2, TYK2 в лизатах лимфоцитов 49
2.3.9 Определение внутриклеточного IFN-y и активной формы транскрипционного фактора T-bet в лимфоцитах периферической крови методом двухцветной проточной цитофлуориметрии 50
2.3.10 Исследование базальной и 1Ь-12/1Ь-27-индуцированной секреции IFN-y лимфоцитами крови методом иммуноферментного анализа 53
2.4 Статистический анализ результатов 53
ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований 55
3.1 Общее количество лейкоцитов и содержание лимфоцитов в периферической крови у больных туберкулезом легких 55
3.2 Содержание Т-лимфоцитов в крови у больных туберкулёзом лёгких 57
3.3 Содержание активных форм факторов транскрипции STAT1, STAT4 в лизатах 1Ь-12/1Ь-27-индуцированных лимфоцитов крови у больных туберкулезом легких 58
3.4 Содержание активных форм тирозиновых киназ JAK1, JAK2 и TYK2 в лизатах 1Ь-12/1Ь-27-индуцированных лимфоцитов крови у больных туберкулезом легких 59
3.5 Количество 1Ь-12/1Ь-27-индуцированных Т-лимфоцитов крови, содержащих транскрипционный фактор T-bet, у больных туберкулезом легких 60
3.6 Количество 1Ь-12/1Ь-27-индуцированных лимфоцитов крови с внутриклеточным содержанием IFN-y у больных туберкулёзом лёгких 63
3.7 Уровень секреции IFN-y в культуре 1Ь-12/1Ь-27-индуцированных
лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких 68
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов исследования 71
Выводы 87
Список принятых сокращений 89
Список литературы
